Методические указания к гигиенической оценке печатных красок, предназначенных для полиграфического оформления упаковочных материалов, применяемых в пищевой промышленности
(утв. Минздравом СССР 03.04.1978 № 1833-78)
Утверждаю Зам. Главного Государственного санитарного врача СССР А. И. Заиченко 3 апреля 1978 г. № 1833-78
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ГИГИЕНИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ ПЕЧАТНЫХ КРАСОК, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ПОЛИГРАФИЧЕСКОГО ОФОРМЛЕНИЯ УПАКОВОЧНЫХ МАТЕРИАЛОВ, ПРИМЕНЯЕМЫХ В ПИЩЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ
Настоящие методические указания предназначены для научных учреждений, работающих в области гигиены и токсикологии красителей, лабораторий санитарно-эпидемиологических станций, выполняющих текущий санитарный надзор за изготовлением и расфасовкой пищевых продуктов, а также для учреждений, промышленных предприятий, занимающихся разработкой и производством печатных красок специальных видов печати.
Методические указания разработаны на основании многолетнего опыта по токсиколого-гигиенической оценке и регламентации красок, а также данных специальной литературы.
В разработке методических указаний принимали участие представители отдела гигиены питания ГСЭУ Минздрава СССР (К.З. Соломатина, Л.М. Пинчук), Всесоюзного НИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс Минздрава СССР (В.В. Станкевич, Н.М. Кузьменко, Т.П. Иванова), кафедры общей гигиены Киевского медицинского института (Р.Д. Габович, Т.Л. Проклина, И.И. Швайко, В.М. Войцоховский).
1. Введение
В связи с совершенствованием форм торговли продуктами питания, повышением ее эстетического уровня, в последние годы большое внимание уделяется расфасовке пищевых продуктов, внешнему оформлению тары и различных упаковочных материалов, что в свою очередь привело к существенному увеличению производства уже применяемых и разработке новых печатных красок для полиграфического оформления упаковочных материалов.
Такие краски представляют собой сложную многокомпонентную систему, содержащую полимер, нередко состоящую из различных продуктов переработки полициклических ароматических углеводородов и других органических соединений, которые могут обладать неблагоприятными свойствами (общетоксическими кумулятивными сенсибилизирующими мутагенными и др.).
Отсутствие прямого контакта отпечатка краски и пищевого продукта (нанесение оттиска на внешнюю сторону упаковки, наличие подвертки, применение таких материалов как жесть, фольга), а также учитывая, что мигрирующие через упаковочный материал количества ингредиентов краски, как правило, малы, позволяет отнести группу печатных красок к химическим факторам малой интенсивности. Однако, при несовершенстве или нарушении технологии при печатании возможен переход краски на внутреннюю сторону упаковочного материала в рулоне, миграция через толщу материала, контакт отпечатка с кожей рук, слизистой оболочкой полости рта, особенно в тех случаях, когда потребителями фасованного продукта являются дети. Постоянное многолетнее потребление упакованных продуктов может способствовать длительному поступлению краски в организм в малых количествах, что является одним из условий проявления их биологического действия.
Из сказанного ясно, что применяемые для печатания на упаковочных материалах краски должны не только придавать им привлекательный вид, но и быть приемлемыми в гигиеническом отношении.
Попадание красок с оттиска в организм человека возможно пероральным путем или через кожу, но только в минимальных количествах, что требует особого методического подхода при их гигиенической оценке, при разработке профилактических мер, санитарном контроле со стороны санитарно-эпидемиологической службы на разных этапах производства и эксплуатации.
Отсутствие в настоящее время унифицированной методической схемы гигиенической оценки красок лишает исследователей возможности качественно и в приемлемые сроки выполнять значительные заказы организаций, разрабатывающих и производящих такие краски, а также при закупке за рубежом, что в свою очередь заметно удлиняет сроки их внедрения. Кроме того, затрудняется действенный контроль за эксплуатацией красок со стороны санитарно-эпидемиологической службы.
2. Порядок представления и правила приема образцов красителей и окрашенных материалов для их лабораторного исследования
Новые краски, как отечественные, так и импортные, предназначенные для печатания на упаковочных материалах, применяемых в пищевой промышленности, могут быть допущены к использованию только с разрешения Главного Санитарно-эпидемиологического управления МЗ СССР. В связи с этим заинтересованные организации должны представлять образцы красок и запечатанные упаковки в соответствующие институты или лаборатории системы МЗ СССР только на основании заказов, направленных в Министерство Здравоохранения СССР. Институты или лаборатории могут принять для исследования такие образцы при наличии поручения органов санитарно-эпидемиологической службы.
Образцы для исследования должны представляться в двух видах:
- в виде образцов самих красок в количестве, достаточном для постановки хронических токсикологических и других исследований на двух видах лабораторных животных (1,0 — 1,5 кг);
- в виде оттисков на упаковочных материалах в количестве не менее 1 м2, с нанесенной на них краской (для каждой краски на каждом виде упаковочных материалов). Запечатывание образцов упаковочных материалов должно производиться по той же технологии, которая будет применяться при печати.
Одновременно с запечатанными образцами и красками заинтересованные организации должны представлять следующие сведения:
- полное название краски, подлежащей регламентации;
- марка, ГОСТ или ТУ как на сам упаковочный материал, так и на краску. При этом, краски, нанесенные на материал, не имеющий разрешения ГСЭУ на применение в пищевой промышленности, не исследуются;
- на новые краски и их компоненты заинтересованные организации должны представлять патентно-информационные справки о поиске на новизну, карты уровня, номера лицензий или другие документы, подтверждающие новизну или патентную чистоту краски, подлежащей исследованию;
- подробную рецептуру красок, структурные формулы составляющих компонентов (или полное их химическое название);
- сведения о том, для каких продуктов предназначен окрашенный упаковочный материал и условия упаковки (с подверткой или без нее);
- краткое описание технологии нанесения краски на упаковочный материал, расход краски на единицу поверхности запечатываемого материала;
- акты испытаний, выполненных производственными лабораториями по технической характеристике красок;
- в тех случаях, когда в состав рецептуры красок входят новые, еще неизученные компоненты, ведомственные институты, лаборатории должны разработать и направить исполнителю чувствительные микрометоды их определения в соответствующих модельных средах;
- расчет экономической эффективности при внедрении в народное хозяйство краски, подлежащей исследованию.
В случае выявления неблагоприятных свойств красок на промежуточных этапах их токсиколого-гигиенического изучения исполнитель прекращает их дальнейшее исследование и извещает об этом заказчика с целью решения вопроса о возможностях изменения технологии производства или нанесения краски на соответствующий упаковочный материал.
Заключения (отчеты) по результатам токсиколого-гигиенической оценки красок должны направляться в Главное Санитарно-эпидемиологическое управление МЗ СССР для рассмотрения и выдачи разрешений на применение их по назначению.
3. Гигиенические требования к печатным краскам, нанесенным на упаковочные материалы, предназначенные для применения в пищевой промышленности
Токсиколого-гигиенические исследования красок и запечатанного ими упаковочного материала для пищевых продуктов проводятся с целью определения их безопасности для здоровья человека. В связи с этим к краскам предъявляются следующие требования:
- краски не должны обладать токсическими и кумулятивными свойствами;
- не должны оказывать аллергического, бластомогенного и других эффектов отдаленного действия;
- краски, нанесенные на упаковочные материалы, должны быть прочно фиксированными на них, быть устойчивыми к действию света, механическим воздействиям, к погодным факторам, химическим реагентам, имитирующим пищевые продукты, а также к пищевым продуктам в процессе опытной эксплуатации;
- не должны иметь остаточного запаха;
- не должны мигрировать на обратную сторону упаковочного материала, окрашенная поверхность материала должна быть чистой, нелипкой, с четкими границами окрашенных участков.
4. Методические подходы к токсиколого-гигиенической оценке красок, предназначенных для печати на упаковочных материалах
Краски, предназначенные для печатания на упаковочных материалах для пищевых продуктов, с гигиенической точки зрения имеют свои особенности:
- они всегда наносятся на внешнюю сторону упаковочного материала, поэтому непосредственный контакт оттиска с пищевым продуктом отсутствует;
- упаковка продукта чаще производится с использованием непроницаемой или малопроницаемой для краски и для продукта подвертки (фольга, пергамент и др.);
- расход краски на единицу поверхности упаковочного материала незначителен;
- прочность фиксации краски обычно высокая и зависит от характера упаковочного материала и способа печати;
- поступление краски в организм возможно только пероральным путем и в незначительных количествах, что полностью исключает вероятность острых и подострых отравлений.
Перечисленные особенности, данные литературы, а также собственные многолетние наблюдения позволяют рекомендовать изменение порядка общепринятой схемы токсиколого-гигиенического изучения красок для печати на упаковках пищевых продуктов и санитарного контроля в процессе их эксплуатации. Отпадает необходимость определения параметров острой и подострой токсичности, установления пороговых доз при однократном и длительном поступлении.
Общетоксические и кумулятивные свойства красок следует оценивать по данным хронического опыта в дозах, близких к реальным их количествам на площади единичного образца упаковки продукта. Возникает необходимость изучения также бластомогенных свойств красок, которые следует проводить с учетом химической структуры входящих в их композицию компонентов.
Токсиколого-гигиеническая оценка красок для печати на упаковках пищевых продуктах должна включать два этапа:
- санитарно-химические исследования окрашенных упаковочных материалов, включая определение солей тяжелых металлов;
- исследование токсических, аллергических, бластомогенных свойств самих красок.
5. Санитарно-химические исследования окрашенных упаковочных материалов
Приступая к санитарно-химическим исследованиям, необходимо помнить, что количество краски в отпечатке на единице упаковки исчисляется милли- или микрограммами и, следовательно, мигрировать в продукт (или на кожу рук) может ничтожно малое ее количество. Поэтому методы количественного определения красок и составляющих их компонентов должны быть высокочувствительными.
Порядок исследований. Исследование окрашенных упаковочных материалов следует начинать с выявления у них запаха. Результаты определения выражают описательно с указанием характера выявленного запаха и его интенсивности, которую характеризуют по 5 балльной шкале. При наличии запаха дальнейшее исследование образцов упаковок прекращается, краска признается непригодной для печати на упаковках пищевых продуктов.
При отсутствии запаха определяют прочность фиксации краски на упаковке к механическим воздействиям путем сминания, стирания, слущивания, и к химическим веществам. Для этого протирают окрашенные поверхности (легкое протирание в течение полминуты) сухим ватным тампоном, тампоном, смоченным в дистиллированной воде, растительном масле, в 1% растворах соляной кислоты, пищевой соды, едкого натра, этилового спирта. Во всех случаях ватные тампоны не должны окрашиваться. О неудовлетворительной фиксации краски на материале следует судить также по изменению внешнего вида образца. Окрашенная поверхность после протирания тампонами должна оставаться чистой, гладкой, нелипкой, с четкими границами окрашенных участков, краска не должна мигрировать на обратную сторону упаковочного материала. Кроме того, определяют возможность миграции красителя через толщу бумажного слоя под нагрузкой: окрашенный образец накрывают 5-ю слоями увлажненной фильтровальной бумаги и помещают между двумя плоскими пластинками, сверху накладывают груз (из расчета 4 г/см2) и оставляют на 6 часов. Оценка может быть дана по пятибалльной системе, однако образец бракуется, если окрашивается хотя бы один слой фильтровальной бумаги.
Дальнейшим этапом исследования является определение возможности миграции составных компонентов красителей в модельные среды, имитирующие пищевые продукты, для которых предназначен упаковочный материал. Режим испытания их рекомендуется следующий: соотношение площади поверхности образца (в см2) к объему среды (в мл) составляет 1 : 2, температура залива 20 °C и 80 °C, экспозиция — от 2-х часов до 1 — 2 суток, в зависимости от материала упаковки. В качестве модельных сред как минимум следует использовать: дистиллированную воду, 3% раствор лимонной кислоты, 3% раствор молочной кислоты, 4% растворы уксусной кислоты и поваренной соли.
В модельных средах определяют в первую очередь органолептические показатели: наличие цвета, осадка, мути, прозрачности, в водных вытяжках по пятибалльной системе — запах, вкус и привкусы.
Химические исследования модельных сред должны включать:
-
выявление и количественное определение основных ингредиентов, входящих в рецептуру краски, нанесенной на упаковку, включая определение солей тяжелых металлов;
-
определение интегральных показателей миграции краски и ее компонентов в модельную среду, в числе которых обязательными должны быть:
- определение в водных вытяжках наличия органических веществ по их окисляемости (бихроматным и перманганатным методами);
- определение бромирующихся веществ во всех вытяжках.
Одновременно, в качестве контроля, исследуется неокрашенный упаковочный материал половинной площади (так как у опытного образца половина площади т.е. одна сторона, закрыта краской).
6. Токсикологическое исследование красок
Задачей хронического токсикологического эксперимента является определение степени опасности краски при многократном поступлении в организм теплокровных животных в количествах, близких к нанесенным на единицу упаковки продукта. Только при проведении такого эксперимента в достаточной степени имитируются практические условия эксплуатации окрашенных упаковок.
Для хронического эксперимента отбирают здоровых интактных животных. В опытах следует использовать молодых животных обоего пола (крыс и мышей). Перед началом эксперимента их надо выдерживать в карантине не менее двух недель. Животных содержат на кормовом рационе согласно существующим нормативам. Продолжительность хронического эксперимента должна составлять один год. При более длительных опытах в организме животных могут наблюдаться различные изменения, связанные со старением (в том числе и у контрольных).
Исследуемая краска вводится ежедневно в организм животных перорально путем смешивания с кормом. Для этого доза краски на группу животных эмульгируется в растительном масле. Ввиду того, что животные, находясь в длительном хроническом эксперименте, могут подвергаться воздействию ряда побочных факторов, необходимо в тех же условиях содержать контрольную группу животных.
Выбор доз при проведении хронического токсикологического эксперимента должен производиться с учетом реальных условий эксплуатации окрашенной упаковки. Следует учитывать, что расход сырой краски при флексографском способе печати на невпитывающих упаковках составляет 0,047 г/дм2, а на впитывающих — 0,037 г/дм2; при глубоком способе печати — 0,031 и 0,021 г/дм2 соответственно; при трафаретном способе печати — 0,20 г/дм2 и 0,25 г/дм2. Надписи и рисунки на единице упаковки чаще всего занимают не более 1 — 10% ее общей площади. Поэтому, как показывают специальные исследования, неоднократное поступление краски в организм при неудовлетворительной фиксации его на упаковке возможно в пределах 1 — 5 мкг.
Сказанное дает нам основание рекомендовать для хронического эксперимента ежедневно вводимую дозу краски порядка 1 мг/кг веса тела животного, что, очевидно, обеспечивает значительное превышение максимально возможных количеств краски, которые могли бы попасть в организм человека.
При проведении токсикологических исследований должны быть использованы как интегральные тесты, позволяющие выявить общетоксическое действие краски на целостный организм, так и специфические показатели, позволяющие оценить особенности влияния биологически активных веществ, входящих в рецептуру краски в малых количествах, таких как, например, пигментов, на отдельные органы и системы организма (нервную систему, кровь, почки, печень и др.).
В продолжение всего эксперимента следует вести тщательное наблюдение за общим состоянием и поведением животных, их внешним видом, состоянием шерстного покрова, опрятности и т.п. с целью своевременного выявления возможных признаков интоксикации. Одним из показателей является динамика веса тела животных, поэтому каждый месяц животных нужно взвешивать.
Из числа интегральных показателей целесообразно определять работоспособность животных (по тесту «плавание» или на тредбане), показатели состояния нервной системы (время скрытого периода рефлекторных реакций на электрораздражитель, суммационно-пороговый показатель, поведенческую реакцию и др.).
Исследование морфологического состава периферической крови должно включать определение гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитарной формулы.
Для изучения влияния красок на функциональное состояние почек определяют количество суточной мочи, ее удельный вес, цвет, прозрачность, запах, pH, белок, сахар, креатинин, азот и др.
Обязательным является исследование показателей, характеризующих функциональное состояние печени — ее ферментативную, белковообразующую, антитоксическую и другие функции: например, активность аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, альдолазы, аргиназы, фосфорилазы, содержание гликогена, аскорбиновой кислоты, фосфорных соединений (фосфор общий, неорганический, органический, АТФ), активность ряда окислительных ферментов.
Также обязательными являются гистологические исследования внутренних органов животных (мозга, печени, почек, сердца, легких, селезенки и др.), а также их весовых коэффициентов.
Интегральные показатели и ряд специфических следует определять в динамике — на протяжении всего хронического эксперимента, желательно через каждые 1,5 — 2 месяца.
7. Изучение сенсибилизирующего действия красок
Гигиеническая регламентация применения красок должна основываться на результатах токсикологических исследований, включающих изучение возможного сенсибилизирующего действия как отдельных красок, так и всего комплекса веществ, могущего мигрировать из упаковочных материалов.
Для первичной оценки аллергенной активности красок, следует использовать экспресс-метод О.Г. Алексеевой и А.И. Петкевич (1972), исключающий влияние факторов, связанных с особенностями путей поступления и длительного курса сенсибилизации.
Метод основан на однократном внутрикожном введении в наружную поверхность уха морских свинок 0,02 мл раствора вещества, разведенного физиологическим раствором или ацетоном, в концентрации 1 : 500 (40 мкг) с помощью туберкулинового шприца. Контрольным животным вводят 0,02 мл растворителя. Выявление сенсибилизации осуществляется на 12 — 14 сутки после инъекции вещества: на участок боковой поверхности туловища (лучше шеи) наносят каплю исследуемого вещества в дозе, превышающей сенсибилизирующую в 1,5 — 2 раза, проводят скарификатором надрез через каплю длиной 1 — 1,5 см. Реакция кожи на месте скарификации учитывается через 4 — 24 — 48 часов по следующей шкале:
отрицательная (-) — размеры надреза такие же, как у животных контрольной группы;
сомнительная (+/-) — гиперемия на месте скарификации;
слабо положительная (+) — гиперемия, в месте скарификации незначительное уплотнение;
положительная средней степени (++) — волдырь до 5 мм, отчетливо заметен и окружен гиперемией;
резко положительная (+++) — гиперемия, волдырь до 10 мм, лихенификации.
Животных контрольной группы делят на 2 подгруппы и скарификационную пробу проводят: одной подгруппе — с растворителем; другой — с исследуемым веществом в разрешающей дозе.
Отрицательный результат, полученный с помощью экспресс-метода, не является свидетельством отсутствия аллергизирующего действия краски.
При этом необходимо проведение дальнейших исследований с изучением иммунологических сдвигов в организме с помощью специфических и неспецифических тестов.
Поскольку доминирующим для красок, предназначенных для печати на упаковочных материалах, является алиментарный путь поступления, углубленные исследования сенсибилизирующего действия последних проводятся при пероральном введении веществ (или экстрактов).
Выбор нетоксической дозы красок для аллергических исследований при алиментарном пути поступления веществ или их комплексов осуществляется с учетом результатов хронического токсикологического эксперимента и данных санитарно-химических исследований экстрактов из готовых изделий.
Выбрав подпороговую дозу (раствор вещества или экстракта) вводят морским свинкам внутрижелудочно через зонд в течение 30 дней. В течение периода сенсибилизации ведется наблюдение за общим состоянием животных (поедание корма, поведение, опрятность, состояние кожных покровов и др.). Затем после 5-дневного перерыва выявляют сенсибилизацию постановкой кожной скарификационной пробы с каплей минимального разведения вещества или комплекса (теста-антигена), не вызывающего видимой реакции у животных контрольной группы.
Постановка и учет скарификационной пробы проводятся по схеме описанной выше (при экспресс-методе). Животным контрольной группы, получавшим внутрижелудочно растворитель, разрешающая доза вводится аналогично тому, как подопытным животным. При отрицательной накожной пробе разрешающую дозу, составляющую 1/2 суммарно полученной при сенсибилизации, вводят внутрибрюшинно и учитывают общее состояние животных: поведение, опрятность, поедание корма, состояние дыхания, выделение из носа, глаз и др. Для выявления сенсибилизирующего эффекта проводится также исследование ряда биохимических и иммунологических показателей крови у животных подопытной и контрольной групп. Для постановки иммунологических реакций необходимо предварительно подобрать такие разведения красок или экстракта из окрашенного материала (тест-антиген), которые не вызывают патологических реакций с сывороткой интактных животных.
Наиболее подходящим объектом для данных исследований являются морские свинки, весом 250 — 300 грамм. Забор крови для исследований проводится пункцией сердца на 12 и 30 дни сенсибилизации и 4 — 5 день после введения разрешающей дозы.
В качестве показателей рекомендуется использовать неспецифические и специфические тесты:
неспецифические — определение абсолютного количества эозинофилов крови по общему методу;
- определение гистаминопектического индекса сыворотки крови (ГПИ);
- определение антигистаминного фактора сыворотки крови (АГФ);
- определение серотонинопектического индекса сыворотки крови (СПИ);
специфические — реакция агломерации лейкоцитов по И.Е. Сосонкину (РАЛ);
- непрямая реакция дегрануляции тучных клеток по Л.И. Зеличенко (РДТК);
- реакция дробного высаливания «непреципитирующего» комплекса антиген-антитело по А.И. Николаеву (РДВА).
При выявлении сенсибилизирующих свойств краска не может быть допущена к применению в контакте с пищевыми продуктами. Вывод о запрещении применения красок по их аллергенной активности должен осуществляться на основании учета результатов скарификационной пробы, биохимических и иммунологических показателей.
Красители, при воздействии которых выявлена положительная или сомнительная кожная скарификационная проба, достоверные изменения биохимических показателей и положительные иммунологические реакции не менее чем у 30% подопытных животных к применению не допускаются.
8. Изучение бластомогенных свойств красок
Краски, предлагаемые для внедрения в практику должны быть безопасными не только с позиций их токсичности, но и бластомогенного действия.
Основанием для экспериментального изучения бластомогенных свойств красок является то, что исходное сырье их синтеза, а также другие компоненты, составляющие сложную полимерную композицию, нередко являются производными полициклических ароматических углеводородов и других продуктов переработки нефти, каменноугольной смолы, которые считаются потенциальными бластомогенами для человека. Краски, применяемые в пищевой промышленности, доступны для всего населения и имеют реальные пути поступления в организм.
При решении вопроса о необходимости изучения бластомогенных свойств данной краски необходимо учитывать имеющиеся литературные данные о бластомогенности подобных или сходных химических соединений, химическую структуру оснований (пигментов), входящих в состав краски, а также других составных компонентов.
Исследованию должны подвергаться выпускные формы красок. Если данные о бластомогенности большинства веществ, входящих в рецептуру краски известны, тогда исследованию подлежат отдельные неизученные ингредиенты, представляющие потенциальную опасность в этом плане. Исключать исследования красок по выявлению бластомогенных свойств можно в том случае, если их безопасность убедительно обосновывается на основании данных литературы. В этом случае необходимо учитывать процентное содержание каждого вещества в рецептуре краски, данные санитарно-химических и токсикологических исследований, а также конкретное назначение краски, характер упаковочного материала, вид продукта, возможная частота его употребления и сроки хранения.
Экспериментальное изучение бластомогенных свойств следует проводить минимум на двух видах лабораторных животных. Наиболее рационально использовать мышей и крыс, так как продолжительность их жизни дает возможность закончить исследования в относительно короткие сроки — 2 - 3 года. Кроме того на этих видах животных проводится абсолютное большинство опытов, что позволяет проводить сопоставление полученных данных с результатами других исследователей. В опыт можно брать как беспородных животных, так и линейных, частота спонтанных опухолей у которых известна. Беспородные животные не обладают однонаправленными, генетически обусловленными реакциями к действию бластомогенных агентов. Подобная генетическая гетерогенность характерна и для популяции людей, что позволит проводить экстраполяцию экспериментальных данных на человека.
Для исследования на линейных животных можно рекомендовать мышей линии C57 черные, CC75, крысы разводки «Вистар» и другие. Сказанное не исключает возможности использовать в опытах и другие виды лабораторных животных: хомячки, кролики, кошки и т.д. Выбор разных видов животных продиктован различными метаболитическими превращениями исследуемых веществ в организме, что может существенно влиять на канцерогенную активность.
Количество мелких лабораторных животных в подопытных группах должно составлять к началу опыта 100 — 125, с тем чтобы к его окончанию (через 1,5 — 2,5 года) дожили по крайней мере — 70 — 90 (количество, необходимое для получения достоверных данных при статистической обработке). Количество самцов и самок в каждой группе должно содержаться поровну. Учитывая, что молодые животные более чувствительны к канцерогенным веществам, исследования нужно начинать на мышах весом 15 — 18 г, крысах — 70 — 90 г.
Путь введения исследуемых веществ определяется данными о реальных путях поступления их в организм человека. В данном случае исследования следует проводить при пероральном введении путем вспаивания (если препарат растворим в воде) или внутрижелудочно с помощью зонда. Не исключено введение также с кормом при пересчете его на количество животных содержащихся в одной клетке. Срок введения с кормом или питьевой водой ежедневно, а через зонд 2 — 3 раза в неделю, в течение 12 — 15 месяцев. Наблюдение за животными до естественной гибели.
Выбор дозы вводимого вещества по сути определяет цель проводимого исследования — выявление бластомогенной опасности в дозах, близких к реально возможным при поступлении в организм человека. Такая доза составляет, примерно, 1 мг/кг веса. Результаты исследования препарата в этой дозе будут определять реальную бластомогенную опасность.
Оценка результатов проводится по данным патологоанатомических исследований путем сопоставления количества опухолей, выявленных в подопытных и контрольной группах животных, подвергнутых статистической обработке.
При этом следует учитывать также время появления первых новообразований (латентный период), их локализацию (органотропность), а также гистологическую характеристику.
Учет результатов экспериментальных исследований рекомендуем по схеме, представленной в таблице.
Заключение о возможности использования красителей для печати на упаковочных материалах, предназначенных для пищевых продуктов, возможно при отсутствии достоверного различия количества опухолей в подопытных и контрольных группах всех используемых видах лабораторных животных, а также при отсутствии опухолей нетипичной локализации.
В том случае, когда выявленные опухоли, хотя бы у одного вида животных, при воздействии красок даже в большой дозе достоверно отличаются от таковых в контрольной группе или имели опухоли нетипичной локализации, применение их недопустимо.
Таким образом, полученные данные экспериментальных исследований красок для полиграфического оформления материалов, предназначенных для упаковки пищевых продуктов (санитарно-химические, токсикологические, аллергенные, бластомогенные) служат основанием для заключения о возможности или запрещении (при выявлении статистически достоверных результатов хотя бы по одному из разделов исследования) их использования.
Выявленные достоверные изменения на первых этапах исследования служат основанием для прекращения дальнейшего их изучения, о чем делается соответствующее заключение и возможные предложения заявителю по их устранению.