Методические указания по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки, пораженных грибами рода Фузариум секции sporotrichiella

(утв. Минздравом СССР 23.03.1978 № 1829-78)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Методические указания по определению... (от 23.03.1978 N 1829-78)"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/1829-78" "Методические указания по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки, пораженных грибами рода Фузариум секции sporotrichiella (утв. Минздравом СССР 23.03.19"
  n1["Определение токсичности зерна... (от 31.12.1987 N 4541-87)"]:::rst
  click n1 "https://bukva.ai/docs/sanitarnye-pravila-4541-87" "Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек (утв. Минздравом СССР 31.12.1987 N 4541-87)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТОКСИЧНОСТИ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР И ПРОДУКТОВ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ, ПОРАЖЕННЫХ ГРИБАМИ РОДА ФУЗАРИУМ СЕКЦИИ SPOROTRICHIELLA

Методические указания подготовлены Институтом питания АМН СССР и Оренбургским медицинским институтом.

Методические указания рекомендуются для использования в работе лабораторий санэпидстанций.

В зерновых культурах, убранных или произраставших в неблагоприятных метеорологических условиях (обильные дожди, ранний снег), запоздалой уборки урожая, поздно осенью вывезенных с поля, а также своевременно убранных, но недостаточно просушенных или хранившихся в условиях повышенной влажности, может отмечаться повышенная их пораженность токсигенными микроскопическими грибами из рода Фузариум и вследствие этого зерно приобретает ядовитые свойства. Продукты жизнедеятельности этих грибов не теряют своих свойств при термической обработке: выпечке хлеба, варке пищи и т.д. Поэтому употребление в пищу такого зерна и продуктов его переработки может стать причиной в некоторых случаях протекающих очень тяжело заболеваний людей (алиментарно-токсическая алейкия, расстройства функции кишечного тракта и др.).

В последние годы в урожае хлебов иногда обнаруживают зерна с розовым и красным оттенками, особенно в зерне ржи, имеющие внешние признаки, характерные для зерна, пораженного Фузариум. Однако следует иметь в виду, что окраска зерна не всегда связана с его токсичностью. Такое зерно является лишь «подозрительным» на токсичность.

С целью профилактики зерновых пищевых микотоксикозов людей зерно, подозрительное по вышеуказанным показателям, должно исследоваться на токсичность биологическими методами. Обязательным является испытание зерна на голубях. Биопроба с культурой дрожжей желательна в качестве подтверждающего теста.

I. Материал для исследования

Исследованию подлежат:

1. Зерно нормальных сроков уборки, но имеющее окрашенные в розовый или красный цвет зерна, что вызывает подозрение на обсеменение их микроскопическими грибами из рода Фузариум, а также продукты переработки такого зерна.

2. Зерно нормальных сроков уборки, но хранившееся при неблагоприятных условиях, имеющее следы плесневения (подозрительное при визуальном осмотре), а также продукты переработки такого зерна.

II. Отбор зерна и его паспортизация

Пробы отбираются от каждой поступающей партии зерна, в соответствии с ГОСТом 3040-55.

Отобранные образцы должны быть паспортизованы. На этикетках указывается:

а) место отбора зерна (область, район, колхоз, совхоз и т.д.);

б) наименование зерновой культуры (пшеница, рожь, просо и др.);

в) количество зерна, от которого взята проба (или размер партии);

г) откуда взят образец (снят на корню, из валков, со склада);

д) дата отбора пробы;

е) вес взятого образца;

ж) фамилия ответственного за отбор проб.

Отобранные образцы направляют на исследование в ближайшую санитарно-эпидемиологическую станцию.

III. Подготовка материала для исследования и получение экстракта липидов

Из поступившего на исследование зерна отбирают среднюю пробу около 200 г, подсушивают ее при температуре 40 — 50°, из них 100 г измельчают на лабораторной мельнице в течение двух минут и экстрагируют диэтиловым эфиром в аппарате Соколета в течение 6 часов. Эфирный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием, отфильтровывают и эфир отгоняют на водной бане при температуре не выше 40 — 50 °C. Полученный масляный остаток — свободные липиды — используют для определения токсичности.

В каждом случае при проведении анализа необходимо ставить контрольную пробу с доброкачественным зерном.

IV. Биологическая проба на голубях

В качестве тест-объекта используют голубей породы «Сизарь» в количестве не менее трех птиц на каждый образец зерна. Кормление голубей проводят испытуемым зерном натощак из расчета 5 г зерна на 1 кг веса птицы в течение 14 дней (кормят из чайной ложки, насильственно открывая клюв). После кормления ставят в клетку воду, а через 2 часа обязательно обычный корм <*>. --------------------------------

<*> Нормы питания голубей:

1. <a id="p100029"></a>Вика    - 30%

2. <a id="p100030"></a>Горох   - 20%

3. <a id="p100031"></a>Ячмень  - 10%

4. <a id="p100032"></a>Просо   - 20%

5. <a id="p100033"></a>Пшеница - 15%

6. <a id="p100034"></a>Конопля - 5%
-----------------

40 г

При отсутствии указанных ингредиентов можно использовать следующие:

1. <a id="p100037"></a>Пшено   - 20 г

2. <a id="p100038"></a>Семечки - 10 г

3. <a id="p100039"></a>Конопля - 5 г

4. <a id="p100040"></a>Пшеница - 5 г
-----------------

40 г

Каждый голубь содержится в отдельной клетке, на дно которой стелится светлая бумага, чтобы не пропустить выделения рвотных масс и наличия жидкого стула.

В течение опыта следят за общим состоянием и весом птицы. При отсутствии положительной реакции голубей в течение опытного периода птиц забивают методом декапитации и производят макро- и микроскопические изучения органов тканей (слизистых оболочек клюва, гортани, пищевода, желудочно-кишечного тракта, обращая особое внимание на состояние печени, почек, селезенки).

При наличии симптомов заболевания голубей (рвота, понос) или гибели испытуемое зерно оценивается как токсичное.

При отсутствии клинической картины заключение о зерне дают уже по патоморфологическим данным, исключая интеркурентные заболевания.

V. Определение токсичности зерна при помощи чувствительного к фузариотоксину штамма дрожжей Saccharomyces fragilis 25Д (ориентировочный метод)

В качестве тест-организма для определения фузариотоксинов этот штамм дрожжей был предложен Институтом микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного АН УССР.

Для анализа используют 24-часовую культуру дрожжей на сусловом агаре. В пробирку с культурой дрожжей наливают 5 — 10 мл стерильной водопроводной воды. Пробирку взбалтывают до образования суспензии. Суспензию готовят по эталону № 5, что соответствует 5 единицам мутности (0,5 млрд./1 мл) стандарта мутности. 1 — 2 мл суспензии наливают в заранее приготовленные чашки Петри и заливают расплавленным и охлажденным до 60° сусло-агаром из расчета 20 мл на чашку и тщательно перемешивают. На застывшую поверхность среды помещают стерильные диски, вырезанные из фильтровальной бумаги, диаметром 5 мм, на которые наносят 0,01 мл липидов, выделенных из исследуемого зерна.

Чашки Петри помещают в термостат при температуре 35 °C на сутки, после чего определяют результаты опыта. Степень токсичности липидов определяют по диаметру стерильных зон: диаметр стерильной зоны до 15 мм — зерно слаботоксичное; 15 — 25 мм — среднетоксичное; выше 25 мм — резкотоксичное; контроль — отсутствие стерильных зон.

VI. Заключение по результатам исследования образца зерна

Заключение о пригодности исследуемого образца зерна в питании дается на основании результатов биологических проб на голубях и дрожжевых грибах.

1. Отсутствие клинической картины заболевания у голубей и отсутствие зон задержки роста дрожжей на чашках Петри — зерно нетоксичное.

2. Наличие симптомов заболевания у голубей и наличие задержки роста дрожжей — зерно токсичное.