Методические указания по патогистологической диагностике прионных инфекций животных

(утв. Минсельхозпродом России 06.05.1997 № 13-7-2/939)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Ветеринарно-санитарные правила перевозки... (от 17.05.1966)"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/veterinarno-sanitarnye-pravila-perevozki" "Ветеринарно-санитарные правила перевозки животных, птицы, рыбы, продуктов и сырья животного происхождения автомобильным и воздушным транспортом (утв. Минсельхозом СССР 17.05.1966)"
  n1["Методические указания по лабораторной... (от 11.06.1986 N 432-5)"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/432-5" "Методические указания по лабораторной диагностике катаральной лихорадки крупного рогатого скота, овец и коз (утв. Госагропромом СССР 11.06.1986 N 432-5)"
  n2["Методические указания по патогистологической... (от 06.05.1997 N 13-7-2/939)"]:::doc
  click n2 "https://bukva.ai/docs/13-7-2939" "Методические указания по патогистологической диагностике прионных инфекций животных (утв. Минсельхозпродом России 06.05.1997 N 13-7-2/939)"
  n1 --> n2
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

Утверждаю Начальник Департамента ветеринарии

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ПАТОГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ПРИОННЫХ ИНФЕКЦИЙ ЖИВОТНЫХ

1. Общие положения

1.1. Прионные инфекции — медленно прогрессирующие болезни овец и коз (скрепи), крупного рогатого скота (губкообразная энцефалопатия), норок (трансмиссивная энцефалопатия), протекающие с симптомами поражения центральной нервной системы и развитием в головном мозге изменений, характерных для губкообразной энцефалопатии.

Возбудитель болезни — инфекционный белок «прион» — специфический сиалогликопротеин, образующий в головном мозге бляшки скрепи-ассоциированных фибрилл, отличается чрезвычайно высокой устойчивостью к действию физических и химических факторов.

1.2. Диагностика указанных инфекций основана на гистологическом исследовании головного мозга животных, имевших при жизни симптомы поражения центральной нервной системы и убитых в терминальной стадии болезни.

1.3. При подозрении на прионные инфекции в ветеринарную лабораторию направляют головной мозг овец, коз и норок — целиком, крупного рогатого скота при первичной постановке диагноза — целиком, из неблагополучных по губкообразной энцефалопатии хозяйств — можно только стволовую часть (обязательно ромбовидный и средний мозг).

1.4. Головной мозг овец, коз, крупного рогатого скота или норок сразу же после извлечения из полости черепа непосредственно в хозяйстве или на мясокомбинате фиксируют в 10%-ном солевом растворе формалина, который готовят по следующей прописи: 8,5 г поваренной соли растворяют в 900 мл дистиллированной воды, затем добавляют 100 мл формалина, содержащего 40% формальдегида. Объем солевого раствора формалина должен в 10 раз превышать объем фиксируемого головного мозга. Фиксацию головного мозга проводят в течение 14 суток со сменой фиксатора через неделю.

2. Патогистологическое исследование

2.1. Для гистологического исследования вырезают поперечные кусочки толщиной 0,3 — 0,5 см из следующих отделов головного мозга:

• на скрепи овец и коз — из продолговатого мозга (каудальная, средняя и краниальная части), варолиевого моста, четверохолмия, одновременно для исключения висны — дополнительно из коры головного мозга (свод боковых желудочков) - рис. 1;
• на губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота — из продолговатого мозга (области задвижки и задних ножек мозжечка), среднего мозга (область ростральных холмов) - рис. 2 и 3;
• на трансмиссивную энцефалопатию норок — из коры головного мозга (свод боковых желудочков), аммонова рога, варолиевого моста и ножек мозжечка.

2.2. Вырезанные кусочки головного мозга дополнительно фиксируют в течение суток в аналогичном солевом растворе формалина, уплотняют в целлоидине или парафине, после чего готовят гистологические срезы, которые окрашивают гематоксилин-эозином.

2.3. При заболевании животных прионными инфекциями в гистопрепаратах головного мозга обнаруживают следующие патогистологические изменения:

• скрепи овец и коз — дистрофические изменения нервных клеток, из которых диагностическое значение имеет массовая вакуолизация цитоплазмы нейронов, реже — гипертрофию и пролиферацию астроцитов, вакуолизацию серого вещества;
• губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота — вакуолизацию серого вещества, реже цитоплазмы нервных клеток, гипертрофию и пролиферацию астроцитов;
• трансмиссивная энцефалопатия норок — дистрофию, в том числе вакуолизацию цитоплазмы нейронов, гипертрофию и пролиферацию астроцитов, вакуолизацию серого вещества.

2.4 Диагноз на прионные инфекции при наличии характерных клинико-эпизоотологических данных ставят в случае обнаружения:

• скрепи овец и коз — не менее 15 вакуолизированных нервных клеток в одном или не менее 20 в двух-трех гистопрепаратах;
• губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота — вакуолизации серого вещества (в отличие от скрепи имеет основное диагностическое значение) головного мозга или цитоплазмы нейронов;
• трансмиссивная энцефалопатия норок — не менее 20 вакуолизированных нервных клеток в одном гистопрепарате головного мозга.

2.5 Прионные инфекции необходимо дифференцировать:

• скрепи овец и коз — от висни, листериоза (нервная форма), бешенства, болезни Ауески, отравлений различными веществами, а при наличии симптома зуда — от трихофитии, стрептотрихоза, демадекоза, чесотки;
• губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота — от листериоза, бешенства, болезни Ауески, инфекционного ринотрахеита (нервная форма), злокачественной катаральной горячки, губкообразности белого вещества головного мозга неизвестной этиологии, а также отравлений различными веществами;
• трансмиссивную энцефалопатию норок — от алеутской болезни, самопогрызания, бешенства.

2.6. Срок исследования — не более 25 суток со дня начала фиксации головного мозга животного.

С утверждением настоящих Методических указаний на территории Российской Федерации не действуют Временные методические указания по патогистологическим исследованиям на скрепи овец и коз, утвержденные Главветупром Госагропрома СССР 17.01.87 № 432-5.

Приложение

Клинико-эпизоотологические данные. Длительный инкубационный период (не менее 9 месяцев). Заболевают только взрослые животные, чаще в возрасте от 1 до 4 лет. Симптомы поражения центральной нервной системы. Длительная клинико-морфологическая стадия болезни (не менее 4 — 6 нед, обычно несколько месяцев, редко до года). Отсутствие повышение температуры тела. Постепенное и постоянное выделение больных животных. 100% летальность. Избирательное поражение головного и спинного мозга. В естественных условиях узкий круг восприимчивых животных.

Ведущим наиболее характерным и постоянным симптомом при скрепи является атаксия: в начале болезни — неуверенные, некоординированные движения, спотыкания во время ходьбы; позднее — слабость конечностей, чаще тазовых, что обуславливает отклонение в стороны задней части туловища при ходьбе и падение при беге. По мере развития болезни передвижение больных животных все более затрудненно, овцы часто падают не только при беге, но и при ходьбе, долго лежат, поднимаются с большим трудом. К исходу болезни может развиваться парез и паралич конечностей, чаще тазовых.

Для ранней стадии болезни характерны беспокойство и пугливость животных. У больных животных отмечают частое переступание конечностями, настороженность и неподвижность взгляда, сменяющиеся резкими движениями глазного яблока, скрежет зубами. У некоторых животных можно наблюдать частичную или полную потерю зрения, напряженность и дрожание мышц шеи, дрожание губ, кивание, иногда кручение головой.

При некоторых энзоотиях скрепи одним из ведущих симптомов является зуд и, как следствие его, участки облысения, расчесы и погрызы кожи, чаще наблюдаемые в области головы, шеи, спины, бедер, основания хвоста.

Аппетит и упитанность у больных животных сохраняются длительное время. В конечной стадии болезни развивается истощение животных.

На основании клинико-эпизоотологических данных можно поставить диагноз на медленные инфекции, но без дифференцировки на скрепи и висну.

Патологоанатомические изменения. У животных, больных скрепи, при наличии при жизни симптома зуда обнаруживают участки облысения и повреждения кожи. В терминальной стадии болезни отмечают атрофию скелетной мускулатуры. Редко выявляют гиперемию сосудов мягкой оболочки головного мозга.

Патогистологические изменения. Для скрепи характерны альтеративные изменения при отсутствии воспалительных, симметричность поражений в головном мозге, губкообразность серого вещества головного мозга, пролиферация астроцитарной глин. Альтеративные изменения можно условно разделить на «специфические» и «неспецифические».

К «специфическим» изменениям, имеющим диагностическое значение, относят массовую вакуолизацию нейронов, заканчивающуюся лизисом (выпадением) нервных клеток. Наиболее типичны однокамерные вакуоли, занимающие все или почти все тело нейрона. Реже встречают многокамерные вакуоли.

«Неспецифические» изменения представлены острым набуханием нервных клеток, очаговым или диффузным распылением хроматофильного вещества, хроматолизом, неравномерным гиперхроматозом и пикноморфностью нейронов; набуханием, пикноморфностью, лизисом и эктопией их ядер.

Основные альтеративные изменения, в том числе и вакуолизированные нервные клетки, при скрепи локализуются преимущественно в продолговатом мозге и варолиевом мосту на уровне корешков У1 — ХП пар черепномозговых нервов.

Диагноз на скрепи ставят на основании данных гистологического исследования с обязательным учетом клинико-эпизоотологических данных, характерных для медленных инфекций.

Дифференциальная диагностика. Скрепи необходимо дифференцировать от висны, листериоза (нервная форма), бешенства, болезни Ауески, отравлений фосфорорганическими, хлорорганическими, карбоматными, ртутьорганическими соединениями, фосфидом цинка, мышьяком, поваренной солью, а при наличии симптома зуда — от трихофитии, стрептотрихоза, демадекоза, чесотки.

Дифференциальная диагностика скрепи и висны не представляет трудностей. Несмотря на наличие во многом сходных для обеих болезней клинико-эпизоотологических данных, гистологически при скрепи в головном мозге обнаруживают альтеративные изменения, в том числе вакуолизацию нейронов, в то время как для висни характерны воспалительные изменения, в виде негнойного демиелинизирующего менингоэнцефалита.

Для нервной формы листериоза характерны: короткий инкубационный период, болеют овцы всех возрастов, но ягнята в более тяжелой форме, острое течение, повышение температуры тела, быстрое распространение болезни в хозяйстве, выделение возбудителя болезни — listeria monocytogens. Гистологически в головном мозге выявляют изменения, характерные для гнойного воспаления.

При бешенстве обнаруживают дессиминированный негнойный энцефаломиелит, а также тельца Негри в цитоплазме нервных клеток. Острый негнойный менингоэнцефалит характерен для болезни Ауески. Эти болезни имеют короткий инкубационный период, острое течение. Болезнь Ауески быстро распространяется в отаре. Заболевают животные всех возрастов.

Для отравлений животных вышеуказанными веществами характерны симптомы поражения центральной нервной системы: возбуждение, сменяющееся угнетением, клонические и тонические судороги, мышечная дрожь, ослабление рефлексов, сужение или расширение зрачка, атаксия, парез и паралич конечностей.

При этом обычно одновременно отмечают симптомы поражения органов пищеварения (затрудненное глотание, диарею, реже запор и тимпанию), ослабление сердечной деятельности; при некоторых отравлениях — частое мочеиспускание. Течение отравлений, сопровождающихся поражением центральной нервной системы, острое или подострое, болеют животные всех возрастов, заболевание ограничено во времени, нередко выделяется большое количество больных в короткий отрезок времени.

Гистологически в головном мозге (нередко и в спинном) обнаруживают расстройство гемодинамики (повышенное кровенаполнение сосудов, серозно-фибринозный отек их стенок, периваскулярные отеки, отек мозгового вещества), дистрофию нейронов (при некоторых отравлениях их вакуолизацию), гибель нервных клеток с их распадом и образованием клеток-теней, демиелинизацию мозгового вещества, очаговые некрозы.

При трихофитии, стрептотрихозе, демадекозе, чесотке изменения ограничиваются поражением кожи, при этом выделяют соответствующих возбудителей.

Клинико-эпизоотологические данные. Инкубационный период при губкообразной энцефалопатии длительный (не менее 20 месяцев). Симптомы болезни проявляются только у взрослых животных (от 20 месяцев до 11 лет). Клинического проявления болезни у телят не отмечают, но они могут быть инфицированы возбудителем губкообразной энцефалопатии.

Для болезни характерны симптомы поражения центральной нервной системы: испуг, стремление к уединению, животное стоит с опущенной головой, часто упираясь ею в стену, спина дугообразно изогнута, при движении, наоборот, позвоночник вогнут; повышенная возбудимость, агрессивность, проявляющаяся боданием, ляганием, иногда клиникой бешенства; неадекватная реакция на прикосновение, шум (испуг, падение, мышечная дрожь, мигание, лягание); беспорядочное движение головой, трутся или бьются ею о стену; атаксия тазовых и грудных конечностей, проявляющаяся неуверенной походкой, падением, особенно при беге и резких поворотах, бегом, похожим на бег рысака, животное после падения поднимается с трудом; тремор, редко миоклонические судороги, могут сокращаться отдельные группы волокон мышцы, мышечная дрожь нижней части шеи, подгрудка, области плеча, реже других частей тела; обвислость или неправильное положение ушей (направлены вперед или назад), может быть поднята верхняя губа, ноздри расширены, чихание, фырканье, частое облизывание носового зеркальца, скрежет зубами. Указанные симптомы могут наблюдаться в разных сочетаниях и с различной степенью выраженности.

Повышение температуры тела не отмечают. Болезнь всегда прогрессирует и заканчивается петельно. Длительность клинико-морфологической стадии болезни от одного до пяти месяцев и больше. Могут быть отдельные случаи ремиссии.

Патологоанатомические изменения. На вскрытии видимые изменения отсутствуют.

Патогистологические изменения. Ведущее место среди изменений в головном мозге занимает вакуолизация серого вещества. Вакуолизация цитоплазмы нейронов встречается реже, чем при скрепи овец. Имеют место и другие виды дистрофий нервных клеток, но они самостоятельного значения в диагностике болезни не имеют.

Диагноз. Диагноз на губкообразную энцефалопатию крупного рогатого скота ставят на основании результатов гистологического исследования с обязательным учетом клинико-эпизоотологических данных, характерных для этой болезни.

Дифференциальный диагноз. Губкообразную энцефалопатию необходимо дифференцировать от листериоза, бешенства, болезни Ауески, нервной формы инфекционного ринотрахеита, злокачественной катаральной горячки, губкообразности белого вещества неизвестной этиологий, а также отравлений фосфорорганическими, хлорорганическими, ртутьорганическими, карбоматными соединениями, фосфидом цинка, мышьяком, поваренной солью.

Дифференциация от листериоза, бешенства, болезни Ауески основана на показателях, описанных при скрепи овец, за исключением более медленного распространения листериоза в стаде.

Нервной формой инфекционного ринотрахеита болеют только телята, инкубационный период болезни короткий, течение острое, для гнете-картины характерен острый негнойный менингоэнцефалит.

При злокачественной катаральной горячке инкубационный период от нескольких недель до нескольких месяцев, течение болезни чаще острое или подострое, болеет только взрослый скот (4 — 5 лет и старше), больные животные выделяются постепенно. Из гистологических изменений отмечают негнойный менингоэнцефалит с серозно-фибринозными периваскулитами.

При губкообразности белого вещества головного мозга вакуоли находят не в сером, а в белом веществе. Этиология болезни не известна.

Клинико-эпизоотологические данные. Инкубационный период не менее 8 месяцев. Болеют взрослые животные, в возрасте одного года и старше. Для болезни характерны симптомы поражения центральной — нервной системы: повышенная возбудимость, бесцельное бегание в клетке, неуверенная, шаткая, скованная походка, отрывистые резкие движения тазовыми конечностями. Хвост располагается поверх спины. Животные часто кусают его, при этом двигаются по кругу. К ранним симптомам относят исчезновение инстинкта поддержания чистоты клетки, отсутствие заботы о щенках, затрудненное глотание. При прогрессировании болезни характерно сильное истощение, животное перестает двигаться, обычно сидит в полусонном состоянии в углу клетки, вцепившись зубами в проводку. Отмечают легкий тремор, иногда судороги. Продолжительность болезни 3 — 6 недель. Температура тела не повышается. Исход болезни летальный. Возможно бессимптомное течение болезни, при котором отмечают периодический отказ от корма, сильное угнетение, исхудание и смерть.

Патологоанатомические изменения почти отсутствуют. Отмечают истощение, исчезновение жировых депо в подкожной клетчатке, а также анемию и отек головного мозга.

Патогистологические изменения. Для трансмиссивной энцефалопатии норок характерны: вакуолизация мозгового вещества, дистрофия нервных клеток, пролиферация астроцитов. Устанавливают хроматолиз, пикноморфность и склероз нервных клеток коры, стволовой части головного мозга и мозжечка. Наиболее характерны вакуолизация цитоплазмы нейронов и серого вещества, которые выявляют преимущественно в области свода боковых желудочков и в аммоновом роге.

Диагноз на трансмиссивную энцефалопатию норок ставят на основании обнаружения в головном мозге вакуолизации мозгового вещества, дистрофии, в том числе вакуолизации нейронов, пролиферации астроцитарной глии.

Дифференциальный диагноз. Трансмиссивную энцефалопатию норок необходимо дифференцировать от алеутской болезни, самопогрызания, а также от бешенства (см. скрепи овец).

Алеутская болезнь протекает медленно и сопровождается сильным истощением. При вскрытии устанавливают тяжелое поражение почек, печени, селезенки, лимфатических узлов, желудка и тонкого кишечника, чего не отмечают при трансмиссивной энцефалопатии. Патогистологически для алеутской болезни характерны периартерииты, в том числе некротические, гломерулонефрит, плазмоклеточная реакция в различных органах.

Самопогрызание обычно отмечают у щенков норок в возрасте 45 суток, при котором обнаруживают травмы кожи.