Методические указания по определению патогенности аэромонад по степени ДНКазной активности

(утв. Минсельхозпродом России 09.12.1997 № 13-4-2/1116)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Ветеринарно-санитарные правила перевозки... (от 17.05.1966)"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/veterinarno-sanitarnye-pravila-perevozki" "Ветеринарно-санитарные правила перевозки животных, птицы, рыбы, продуктов и сырья животного происхождения автомобильным и воздушным транспортом (утв. Минсельхозом СССР 17.05.1966)"
  n1["Методические указания по лабораторной... (от 11.06.1986 N 432-5)"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/432-5" "Методические указания по лабораторной диагностике катаральной лихорадки крупного рогатого скота, овец и коз (утв. Госагропромом СССР 11.06.1986 N 432-5)"
  n2["Методические указания по определению... (от 09.12.1997 N 13-4-2/1116)"]:::doc
  click n2 "https://bukva.ai/docs/13-4-21116" "Методические указания по определению патогенности аэромонад по степени ДНКазной активности (утв. Минсельхозпродом России 09.12.1997 N 13-4-2/1116)"
  n1 --> n2
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

Утверждаю Заместитель начальника Департамента ветеринарии В. В. Селиверстов 9 декабря 1997 г. № 13-4-2/1116

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПАТОГЕННОСТИ АЭРОМОНАД ПО СТЕПЕНИ ДНКазной АКТИВНОСТИ

С утверждением настоящих Методических указаний утрачивают силу «Методические указания по определению патогенности аэромонад по степени ДНКазной активности», утвержденные ГУВ Госагропрома СССР 8.05.87 г. № 432-5.

1. Общие положения

1.1. Метод определения патогенности бактерий путем исследования активности бактериальных ферментов позволяет судить о потенциальной способности бактерий вызывать патологический процесс.

1.2. Патогенность (вирулентность) аэромонад зависит от активности продуцирования экстрацеллюлярных энзимов — факторов нестабильности, к которым относится и ДНКаза (дезоксирибонуклеаза);

1.3. Определение ДНКазы используется как косвенный метод определения патогенности. Применение метода ДНКазной активности позволяет получить ответ через 48 часов.

2. Проведение исследования

2.1. Навеску ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) из расчета 200 мг/100 мл среды растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, подщелоченной IN раствором NaOH, вносят в расплавленный мясо-пептонный агар и стерилизуют однократно текучим паром 30 мин. Перед посевом агар расплавляют и стерильно добавляют на каждые 100 мл среды 0,8 мл 10%-ного CaCl2. Расплавленный агар разливают в чашки Петри по 25 мл; после застывания агара чашки подсушивают в термостате.

2.1.1 Можно использовать готовую среду фирм Difco или Gibco.

2.2. Перед посевом дно чашки расчерчивают карандашом по стеклу на 6 — 16 секторов (радиальных или прямоугольных), в каждом секторе ставят соответствующий порядковый номер.

2.3. Для посева используют суточную агаровую культуру испытываемого штамма. Посев производят уколом в центр сектора, не доводя петлю до дна чашки. Для удобства обозначения каждую культуру условно нумеруют от единицы и далее.

2.4 Чашки инкубируют при температуре 25 — 30 °C в течение 48 часов.

2.5. После инкубации на поверхность среды наносят 8 — 10 мл IN раствора HCl, чашки слегка покачивают для равномерного смачивания поверхности среды. Через 10 мин кислоту сливают и учитывают результат.

3. Учет результатов

3.1. Соляная кислота осаждает только полимерную ДНК, образуя хлопьевидный преципитат, в результате чего среда становится матовой. ДНК, деполимеризованная дезоксирибонуклеазой, продуцируемой бактериями, не осаждается, и вокруг этих макроколоний образуются прозрачные зоны.

3.2. Ширина зоны деполимеризации зависит от степени ДНКазной активности и измеряется миллиметровой бумагой от края макроколонии до конца зоны просветления. Учет проводят в миллиметрах ширины зоны деполимеризации или в четырехплюсовой системе:

+ — зона деполимеризации до 2 мм,

++ — зона деполимеризации 2 — 3 мм,

+++ — зона деполимеризации 3 — 5 мм,

++++ — зона деполимеризации 5 мм и более.

3.3. Культуры аэромонад, выделенные из патматериала, дающие зону деполимеризации до 2 мм — слабовирулентные, до 4 мм — вирулентные, более 4 мм — высоковирулентные.