Определение хлорорганических пестицидов в мясе, мясопродуктах и животных жирах хроматографией в тонком слое
(утв. Минздравом СССР 23.01.1975 № 1222-75)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
23 января 1975 г. № 1222-75
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ В МЯСЕ, МЯСОПРОДУКТАХ И ЖИВОТНЫХ ЖИРАХ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ
<*> Разработан Шумковой И.А., Карповой И.Н., Ликуновой С.А. и Рузанковой Л.Д. (Всесоюзный научно-исследовательский институт мясной промышленности).
Метод основан на экстракции пестицидов из пробы ацетоном первичной очистке экстракта от основной части жира «вымораживанием», окончательной адсорбционной очистке экстракта путем колоночной хроматографии на силикагеле АСК и последующей хроматографии очищенных и сконцентрированных экстрактов в тонком слое окиси алюминия или силикагеля.
Чувствительность метода: 0,02 — 0,08 мг/кг продукта.
Реактивы и растворы
Петролейный эфир (температура кипения 40 — 70°), ч.
Натрий сернокислый безводный, хч, просушенный при 150° в течение 5 часов.
Натрий сернокислый — 2-процентный водный раствор и насыщенный водный раствор.
Адсорбенты для тонкослойной хроматографии:
- окись алюминия II степени активности — адсорбент предварительно многократно промывают дистиллированной водой до отрицательной реакции на ион хлора и высушивают на воздухе, просеивают через сито 100 меш;
- силикагель марки КСК (очистку см. «Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, почве и воде», М., 1968);
- пластинки «Силуфол» (ЧССР), предварительно промытые водой в хроматографической камере и просушенные на воздухе, перед использованием активируют в сушильном шкафу при 65° в течение 4 мин.
Кальций сернокислый, просушенный при 150° в течение 6 часов.
Стандартные растворы пестицидов:
- основной раствор: р,р-ДДТ и р,р-ДДЭ по 16 мг и альфа- и гамма-ГХЦГ по 64 мг растворяют в 100 мл гексана;
- рабочие растворы готовят путем разведения основного раствора гексаном в 4 и 8 раз.
Этиловый спирт, гидролизный, высшей очистки.
0,1 г азотнокислого серебра растворяют в 1 мл дистиллированной воды, добавляют 2 мл раствора аммиака (уд. вес 0,9) и доводят объем ацетоном до 20 мл.
Гигроскопическая вата, обезжиренная в аппарате Сокслета.
Приборы и посуда
Сито на 100 меш (диаметр отверстий 0,147 мм).
Гомогенизатор или микроизмельчитель тканей.
Ртутно-кварцевая лампа (ПРК-2 или ПРК-4).
Прибор для отгонки органических растворителей или роторный испаритель.
Камера для хроматографирования (стеклянный сосуд с притертой крышкой или эксикатор).
Пульверизаторы стеклянные для опрыскивания пластинок.
Колбы с притертыми пробками на 250 мл.
Длительные воронки на 100, 250 и 500 мл.
Колбы круглодонные на 150, 250 и 500 мл.
Медицинские шприцы на 1 мл с делениями 0,020 — 0,025 мл для нанесения проб и стандартных растворов.
Стеклянные хроматографические колонки 400 х 20 мм.
Пластинки для хроматографии. Стеклянную пластинку 9 х 12 см моют водой с содой, хромовой смесью, дистиллированной водой, сушат, перед использованием протирают спиртом.
Приготовление пластинок с тонким слоем адсорбента
Окись алюминия и сернокислый кальций тщательно небольшими порциями перетирают в фарфоровой ступке, переносят в колбу и встряхивают с бидистиллированной водой до образования однородной массы. Эта масса должна иметь консистенцию, позволяющую ей свободно растекаться до поверхности стеклянной пластинки без расслоения на твердую фазу и воду.
Так как различные партии адсорбента часто отличаются по своим свойствам, количество добавляемой воды подбирают опытным путем, варьируя его в небольших пределах.
При этом критерием служит консистенция получающейся сорбционной массы.
Соотношение компонентов — окись алюминия:сернокислый кальций:вода = 50:4:90 — 100; силикагель:сернокислый кальций:вода = 35:2:90.
10 г сорбционной массы (2 чайных ложки) наливают на пластинку и равномерно распределяют по всей поверхности. Пластинки сушат при комнатной температуре 18 — 20 часов и хранят в эксикаторе.
Описание определения
Подготовка пробы
200 — 250 г образца 1 — 3 раза измельчают на мясорубке, тщательно перемешивают.
Рекомендуется дополнительное более тонкое измельчение образцов (кроме жировой ткани) в гомогенизаторе.
Экстракция пестицидов и первичная очистка экстрактов
25 г измельченного образца заливают 50 мл ацетона, тщательно перемешивают и нагревают на горячей водяной бане до закипания растворителя. Колбу охлаждают, добавляют в нее 10 мл охлажденного 2-процентного сернокислого натрия, перемешивают и охлаждают 30 минут в ледяной бане. Затем сливают ацетоновый слой в круглодонную колбу через слой обезжиренной ваты. Экстракцию ацетоном с последующим вымораживанием жира повторяют еще 2 раза. Из объединенных экстрактов отгоняют ацетон на роторном испарителе или в приборе для отгонки органических растворителей (температура бани не более 70 +/- 2°) и трижды экстрагируют петролейным эфиром: порциями 20 мл, 10 мл и 10 мл. Продолжительность 1-й экстракции 1 час, последующих — 15 минут. При этом каждый раз перемешивают содержимое в течение 2-х минут, дают слоям разделиться и слой петролейного эфира переносят в делительную воронку (емкость — 500 мл) с 40 мл 2-процентного раствора сернокислого натрия. Смесь осторожно перемешивают в течение 2 минут, дают слоям разделиться и водную фазу отбрасывают. Для улучшения разделения слоев можно добавить несколько мл насыщенного раствора сернокислого натрия. Операцию промывки экстракта повторяют еще 2 раза, после чего петролейный эфир сливают в стакан с 20 г безводного сернокислого натрия, споласкивают делительную воронку дважды 5 мл петролейного эфира. Подсушенный экстракт количественно переносят в мерный цилиндр на 50 мл и доводят петролейным эфиром до 30 мл. Стакан с сернокислым натрием сохраняют.
Колоночная хроматография
В нижнюю часть хроматографической колонки помещают около 500 мг обезжиренной ваты. Затем насыпают силикагель АСК (75 мл для очистки экстрактов свиного жира и 70 мл — для всех остальных).
Силикагель слегка уплотняют постукиванием. Колонку промывают 50 мл петролейного эфира и отжимают сорбент с помощью резиновой груши. Наносят на колонку 30 мл экстракта, дают жидкости стечь и снова отжимают сорбент. Прошедший через колонку растворитель отбрасывают.
Пестициды элюируют 110 мл смеси бензол — петролейный эфир (30:80). Элюирующую смесь вносят порциями по 30 мл, споласкивая каждый раз цилиндр из-под экстракта и стаканчик с безводным сернокислым натрием, в котором подсушивали экстракт.
Элюат собирают в круглодонную колбу на 150 мл. Через 10 мин. после стекания последней порции растворителя отжимают сорбент с помощью резиновой груши.
Элюат упаривают до объема 0,1 мл и наносят на хроматографическую пластинку.
Все органические растворители, остающиеся после упаривания проб и промывки колонок, могут использоваться повторно после перегонки над активированным углем или азотнокислым серебром (1 г/л).
Хроматография в тонком слое
Перед нанесением проб хроматографические пластинки размечают по трафарету, как показано на рис. 1 (не приводится). Слой в 3 мм с вертикальных сторон удаляют, что способствует выравниванию фронта растворителя и улучшает разделение веществ.
Пробу и стандартные растворы наносят медицинским шприцом строго в одну точку, чтобы диаметр пятна не превышал 5 — 6 мм.
Для получения количественных данных каждый образец анализируют дважды: первый раз на пластинку по обе стороны от пробы наносят в три точки стандартный раствор с содержанием пестицидов 1; 5 и 10 мкг (по ДДТ); второй раз содержание пестицидов в «стандарте» подбирается с учетом данных первого определения.
В случае необходимости проведения серийного анализа в производственных условиях можно наносить в одну точку стандартный раствор с содержанием ДДТ — 0,5 мкг и три испытуемых пробы. При необходимости количественной характеристики проб с остатками пестицидов больше 0,5 мкг анализ повторяют, как указано выше.
В качестве подвижного растворителя используют 1-процентный раствор ацетона в гексане.
Содержание остатков пестицидов определяют путем измерения на хроматограммах площадей пятен веществ исследуемой пробы и стандарта со строго одинаковой интенсивностью окраски. Для измерения площадей с хроматограммы снимают копию на кальку, просветленную вазелиновым маслом. Площадь пятен определяют путем наложения копий на кальке на миллиметровую бумагу. Формула для расчета содержания остатков пестицидов в исследуемом образце (в мк/кг):
S х A х 1000
n
X = --------------, S х 25 х 1000 c
где:
S — площадь пятна вещества испытуемой пробы; n
S — площадь пятна вещества стандарта; c
A — содержание вещества в пятне стандарта в мкг;
25 — навеска образца, взятая для определения в г.