---
title: "\"Методические указания по лабораторной диагностике оспы крупного рогатого скота, овец, коз, свиней и верблюдов\""
number: "115-6а"
issuer: "Министерство сельского хозяйства СССР"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/115-6a-minselhoz-sssr-ministerstvo-2"
---

## "Методические указания по лабораторной диагностике оспы крупного рогатого скота, овец, коз, свиней и верблюдов"

# "Методические указания по лабораторной диагностике оспы крупного рогатого скота, овец, коз, свиней и верблюдов"

(утв. Минсельхозом СССР 12.11.1985 N 115-6а)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563).


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждены

</div>

12 ноября 1985 г. N 115-6а


## <a id="p100002"></a>МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ОСПЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ОВЕЦ, КОЗ, СВИНЕЙ И ВЕРБЛЮДОВ



### 1. <a id="p100003"></a>Общие положения


<a id="p100004"></a>1.1. Оспа - контагиозная болезнь животных, протекающая с признаками аутоинтоксикации, лихорадки и узелково-пустулезной сыпи на коже (экзантемы) и на слизистых оболочках (энантемы), проходящей определенные стадии формирования: розеола - везикула - папула - пустула - струп.

#### <a id="p100005"></a>1.2 Оспа у разных видов животных вызывается следующими вирусами:

- <a id="p100006"></a>крупный рогатый скот - оспы коров или осповакцины;
- <a id="p100007"></a>овцы - оспы овец;
- <a id="p100008"></a>козы - оспы коз;
- <a id="p100009"></a>свиньи - оспы свиней, оспы коров или осповакцины;
- <a id="p100010"></a>верблюды - оспы верблюдов, оспы коров или осповакцины.

#### <a id="p100011"></a>1.3 Лабораторная диагностика оспы животных включает в себя:

- <a id="p100012"></a>обнаружение в патологическом материале оспенных частиц (вирионов) методом вирусоскопии;
- <a id="p100013"></a>обнаружение цитоплазматических ацидофильных включений в пораженных участках кожи больного или зараженного животного гистологическим методом;
- <a id="p100014"></a>выделение вируса на куриных эмбрионах (КЭ) с последующей его идентификацией;
<a id="p100015"></a>**- биологическую пробу (в сомнительных случаях) на естественновосприимчивых животных.**

2. <a id="p100016"></a>Отбор, упаковка и пересылка патологического материала.

<a id="p100017"></a>2.1. Патологический материал отбирают не менее чем с 5 участков пораженной кожи. Для сбора и консервирования материала используют стерильные инструменты, посуду и консервирующие растворы.
<a id="p100018"></a>Материал от больных животных, обработанных моющими или дезинфицирующими растворами (едкого натра и др.), к исследованию не пригоден.

#### <a id="p100019"></a>2.2 Для исследования в лабораторию направляют:

- <a id="p100020"></a>мазки, сделанные из содержимого везикул больного животного, и мазки-отпечатки с оспенных поражений кожи;
- <a id="p100021"></a>патологический материал от больных животных (содержимое везикул, целые папулы и пустулы, иссеченные вместе с субэпидермальной отечной тканью).
<a id="p100022"></a>2.3. Мазки высушивают на воздухе, складывая так, чтобы они не соприкасались между собой, и упаковывают в целлофан.
<a id="p100023"></a>2.4. Везикулярную жидкость собирают в капилляры пастеровских пипеток, которые затем помещают в пробирки с резиновыми пробками.
<a id="p100024"></a>2.5. Папулы и пустулы иссекают ножницами вместе с отечной тканью и помещают в два стерильных флакона: один - с 50%-ным раствором глицерина, второй - с 10%-ным раствором формалина.
<a id="p100025"></a>**2.6. Отобранный материал (пробирки и флаконы с патологическим материалом предварительно обрабатывают снаружи 3%-ным раствором хлорамина) упаковывают в металлические коробки или пеналы и направляют с нарочным в лабораторию. Неконсервированный материал доставляют в термосе со льдом в день отбора.**

3. <a id="p100026"></a>Вирусоскопическое исследование.

<a id="p100027"></a>3.1. Для обнаружения вирусных оспенных частиц (вирионов) исследуют мазки и мазки-отпечатки из патологического материала окрашенные по методу Морозова или Пашена (см. [приложение 1](#p100075)).
<a id="p100028"></a>При микроскопии в препаратах обнаруживают множество мелких частиц кокковидной формы, расположенных поодиночке, парами или в виде скоплений. При окраске по Морозову оспенные частицы имеют темно-коричневый цвет, по Пашену - темно-красный.
<a id="p100029"></a>**3.2. Результат исследования считают положительным только при обнаружении вирионов в массовом количестве (в виде россыпей). При отрицательном результате вирусоскопического исследования, а также при обнаружении единичных вирионов проводят дальнейшие исследования.**

4. <a id="p100030"></a>Патогистологические исследования.

<a id="p100031"></a>4.1. Из фиксированных формалином проб кожи на замораживающем микротоме готовят срезы, которые окрашивают гематоксилин-эозином.
<a id="p100032"></a>4.2. При исследовании папул в дерме находят гиперемию, серозный отек и клеточный пролиферат, состоящий из лейкоцитов, гистиоцитов (макрофагов) и фибробластов, в эпидермисе - гиперплазию и некроз кератоцитов.
<a id="p100033"></a>В везикулах обнаруживают скопление серозного экссудата или полиморфноядерных лейкоцитов, лизис клеток дермы, в пустулах - наличие гнойных телец.
<a id="p100034"></a>При оспе в эпителиальных клетках эпидермиса, а у овец и коз также в гистиоцитах сосочкового слоя дермы находят цитоплазматические ацидофильные включения.
<a id="p100035"></a>4.3. Патологогистологический диагноз на оспу свиней и оспу овец считают положительным при обнаружении, кроме вышеописанных изменений [(п. 4.2)](#p100032), внутриядерных вакуолей в кератиноцитах эпидермиса кожи свиней и соответственно, в гистиоцитах собственно кожи (дермы) овец.
<a id="p100036"></a>**4.4. Оспу овец дифференцируют от контагиозного пустулезного дерматита, при котором устанавливают гиперкератоз, пролиферацию эпителия волосяных фолликулов, а также ацидофильные цитоплазматические изменения в кератиноцитах эпидермиса.**

5. <a id="p100037"></a>Выделение возбудителя на куриных эмбрионах.

<a id="p100038"></a>5.1. Пробы исследуемого материала растирают в ступке и готовят 10%-ную суспензию на физиологическом растворе (pH 7,2...7,4).
<a id="p100039"></a>Если патматериал консервирован глицерином, его предварительно отмывают физиологическим раствором.
<a id="p100040"></a>Суспензию центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость отсасывают, добавляют к ней антибиотики (из расчета 500 ЕД/мл пенициллина, 250 мкг/мл стрептомицина и 50 ЕД/мл нистатина); выдерживают при 4 °C 12 ч. Надосадочную жидкость проверяют на бактериальную загрязненность. При отсутствии в течение суток роста микрофлоры в МПБ и на МПА ее используют для заражения куриных эмбрионов.
<a id="p100041"></a>5.2. Выделение вируса оспы коров и осповакцины проводят на куриных эмбрионах 11...12-дневного возраста. Для заражения их используют надосадочную жидкость в разведениях 1:10 (исходное разведение), 1:100 и 1:1000.
<a id="p100042"></a>Перед заражением КЭ овоскопируют, отмечают пугу (воздушный мешок) и бессосудистую зону на боковой поверхности хорионаллантоисной оболочки (ХАО). Затем эмбрионы обрабатывают спиртом с содержанием 0,1% настойки йода и фламбируют.
<a id="p100043"></a>Для заражения эмбриона в скорлупе пробойником делают отверстия в центре пуги и сбоку в бессосудистой зоне. Через боковое отверстие на ХАО вводят по 0,2 мл надосадочной жидкости в разведении 1:10, 1:100 и 1:1000 (по 4 эмбриона на каждое разведение). После введения исследуемую жидкость равномерно распределяют на ХАО осторожным покачиванием яйца. Затем отверстия в скорлупе заклеивают лейкопластырем, яйца укладывают на бок вверх заклеенным отверстием. Для контроля оставляют незараженными 4 КЭ.
<a id="p100044"></a>5.3. Эмбрионы инкубируют при 34,5...35 °C в течение 5 сут, ежедневно просматривая. Гибель эмбрионов в первые сутки считают неспецифической. Эмбрионы, погибшие в более поздние сроки, отбирают, охлаждают и вскрывают. По истечении пяти суток инкубации вскрывают все оставшиеся эмбрионы.
<a id="p100045"></a>5.4. Вскрытие КЭ проводят в стерильных условиях. Пинцетом в месте заражения удаляют скорлупу и глазными ножницами иссекают всю пораженную часть ХАО, которую затем промывают в физиологическом растворе, помещают в чашку Петри и просматривают с помощью лупы на черном фоне на наличие оспенных поражений.
<a id="p100046"></a>5.5. При наличии в патматериале вируса осповакцины к 72-му часу после заражения на ХАО образуются плоские беловатого цвета оспины диаметром 3...4 мм. Вирус оспы коров образует сходные поражения, но отличающиеся резко геморрагическим характером ("красные оспины"), однако отдельные оспины (1...3%) могут быть беловатого цвета.
<a id="p100047"></a>Из пораженных участков ХАО делают мазки для обнаружения частиц вируса оспы методом серебрения по Морозову или окраски по Пашену [(п. 3)](#p100026).
<a id="p100048"></a>При отсутствии специфических поражений на ХАО, суспензией из ХАО делают второй пассаж на КЭ.
<a id="p100049"></a>**5.6. Вирусы оспы овец, коз, свиней, верблюдов на ХАО не вызывают образования специфических изменений.**

6. <a id="p100050"></a>Биологическая проба.

<a id="p100051"></a>6.1. Биологическую пробу проводят на лабораторных или естественновосприимчивых животных, взятых из благополучных по инфекционным болезням хозяйств.
<a id="p100052"></a>6.2. Дифференциацию вируса осповакцины от вируса оспы коров проводят постановкой биопробы на цыплятах, белых мышах или кроликах.
<a id="p100053"></a>6.2.1. Биопроба на цыплятах: у 1,5-месячных цыплят в области голени удаляют перья; в свежеобнаженные фолликулы голени одной конечности (вторая - для контроля) стерильным шпателем втирают 0,6 мл исследуемой надосадочной жидкости [(п. 5.1)](#p100038) или суспензии из пораженной ХАО, в которые предварительно добавляют 20% стерильного глицерина.
<a id="p100054"></a>Вирус осповакцины вызывает образование у цыплят на 7...9-й день после заражения доброкачественного оспенного фолликулита; вирус оспы коров специфических изменений не вызывает.
<a id="p100055"></a>6.2.2. Биопроба на белых мышах: пяти белым мышам массой 15...18 г вводят внутримышечно по 0,2 мл надосадочной жидкости исследуемой суспензии [(п. 5.1)](#p100038).
<a id="p100056"></a>Вирус осповакцины гибели мышей не вызывает; вирус оспы коров вызывает гибель мышей на 5...7-й день после заражения.
<a id="p100057"></a>6.2.3. Биопроба на кроликах: у двух кроликов массой тела 1,5...2 кг на 4 участках в области живота выстригают шерсть на площади 2,5x2,5 см; кожу обрабатывают 70°-ным этиловым спиртом и острым концом стерильного скальпеля делают насечки длиной по 1 см, избегая появления капель крови. В скарифицированную кожу втирают стерильным шпателем по 0,2 мл (на каждый участок) надосадочной жидкости исследуемой суспензии. В суспензию предварительно добавляют 20% глицерина.
<a id="p100058"></a>Вирус осповакцины на 3...5-й день после заражения вызывает у подопытных кроликов на скарифицированных участках кожи образование инфильтратов без геморрагии; вирус оспы коров вызывает образование геморрагических инфильтратов.
<a id="p100059"></a>6.3. Исследования на оспу овец (коз) проводят на двух клинически здоровых ягнятах (козлятах) в возрасте 2...3 мес., взятых от неболевших и невакцинированных против оспы маток.
<a id="p100060"></a>Кожу вентрального бесшерстного участка хвоста подопытных животных обрабатывают 70°-ным этиловым спиртом, затем шприцом внутрикожно в два участка вводят по 0,2 мл надосадочной жидкости исследуемой суспензии (в разведениях 1:20 и 1:200).
<a id="p100061"></a>Биопробу на оспу считают положительной при появлении у ягнят (козлят) на 6...8-й день после заражения характерных оспенных розеол, папул и пустул.
<a id="p100062"></a>6.4. Биопробу на оспу свиней ставят на двух клинически здоровых поросятах в возрасте 2...3 мес. Кожу живота поросят в 4 участках размером 4,0x4,0 см выбривают, обрабатывают спиртом, затем скарифицируют, делая насечки длиной по 3 см. В скарифицированную поверхность кожи каждого участка втирают шпателем по 0,6 мл надосадочной жидкости исследуемой суспензии.
<a id="p100063"></a>Результат исследования на оспу свиней считают положительным при образовании по ходу насечек через 6...8 дней после заражения характерной узелково-пустулезной сыпи и обнаружении в патматериале с этих мест методом микроскопии вирусных оспенных частиц.
<a id="p100064"></a>6.4.1. Дифференциацию возбудителя, вызвавшего оспу у свиней, проводят на куриных эмбрионах [(п. 5)](#p100037) или на поросятах. С этой целью используют 2 поросят, переболевших оспой (подопытные) и 2 здоровых (контрольные). Подопытным и контрольным поросятам втирают в два участка скарифицированной кожи по 2 капли растворенной сухой оспенной вакцины, изготовленной из вируса осповакцины.
<a id="p100065"></a>Развитие оспин на скарифицированной коже подопытных и контрольных животных через 5...8 дней после нанесения вируса осповакцины указывает на наличие в хозяйстве оспы, вызванной вирусом оспы свиней.
<a id="p100066"></a>Отсутствие оспенных поражений на коже подопытных животных (при положительной поствакцинальной реакции у контрольных поросят) свидетельствует о наличия у свиней оспы, вызванной вирусом оспы коров или осповакцины.
<a id="p100067"></a>6.5. Биопробу на оспу верблюдов проводят на одном верблюжонке (отлученном от матки). Кожу бесшерстного вентрального участка хвоста или бесшерстного участка бедра животного обрабатывают спиртом, затем с помощью шприца внутрикожно в два участка вводят по 0,2 мл надосадочной жидкости исследуемой суспензии в разведении 1:20 и 1:200.
<a id="p100068"></a>Результат исследования на оспу верблюдов считают положительным при образовании на 5...7-й день после заражения в местах инокуляции суспензии из патматериала папул и пустул, а также обнаружении в них методом вирусоскопии оспенных частиц.
<a id="p100069"></a>6.5.1. Для дифференциации вируса оспы верблюдов от вируса оспы овец, коров и осповакцины переболевшему оспой и здоровому (контрольному) животным наносят глазной пипеткой на свежескарифицированную поверхность кожи 2...3 капли растворенной сухой оспенной вакцины, изготовленной из вируса осповакцины.
<a id="p100070"></a>Развитие на месте скарификации кожи на 6...7-й день после нанесения вакцины пустул у подопытного и контрольного животных показывает на наличие в хозяйстве оспы, вызванной вирусом оспы верблюдов.
<a id="p100071"></a>Отсутствие реакции у подопытного животного (при положительной поствакцинальной реакции у здорового контрольного животного) свидетельствует о наличии в хозяйстве оспы, вызванной вирусом оспы коров или осповакцины.
7. <a id="p100072"></a>Диагноз на оспу животных считают установленным при получении положительного результата по одному из методов исследования, указанных в [п. 1.2](#p100005).
8. <a id="p100073"></a>Срок исследования: вирусоскопического - 1 день; гистологического - 3...4 дня; выделения возбудителя - 6...12 дней; биопробы - 9 дней.

<a id="p100074"></a>Настоящие Методические указания разработаны Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов (авторы старшие научные сотрудники Е.И. Скалинский, Ю.Ф. Борисович).






## <a id="p100075"></a>Приложение

<div align="right">

**к Методическим указаниям**<br>
**по лабораторной диагностике оспы**

</div>

крупного рогатого скота, овец, коз,
свиней и верблюдов
от 12 ноября 1985 года

1. <a id="p100076"></a>Метод окрашивания элементарных частиц.

#### <a id="p100077"></a>1.1 Окраска по Морозову. Для окрашивания по Морозову предварительно готовят три реактива:

- <a id="p100078"></a>реактив N 1 (жидкость Руге): 1 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл 40%-ого формальдегида и 100 мл дистиллированной воды;
- <a id="p100079"></a>реактив N 2: 5 г танина, 100 мл дистиллированной воды и 1 мл жидкой карболовой кислоты;
- <a id="p100080"></a>реактив N 3: 5 г кристаллического азотнокислого серебра растворяют в 100 мл дистиллированной воды; из этого раствора в отдельный сосуд отливают 20 мл. К 80 мл оставшегося раствора по каплям добавляют 25%-ный раствор аммиака, пока образующийся желтовато-коричневый, а затем буро-черный осадок не растворяется и не останется лишь легкая опалесценция. Если добавление аммиака вовремя не прекращено, то берут раствор азотнокислого серебра (из 20 мл) и добавляют его по каплям до появления легкой опалесценции. Для окраски препаратов готовый реактив разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:10.

<div align="center">

<a id="p100081"></a>На приготовленные препараты [(п. 2.2)](#p100019) наносят реактив N 1 (жидкость Руге), который через 1 мин сливают; промывают дистиллированной водой и протравливают реактивом N 2 при подогревания над пламенем спиртовки до появления паров (1...2 мин). Затем после промывания водой препараты покрывают одним слоем фильтровальной бумаги и обрабатывают реактивом N 3 при легком подогревании, пока мазки приобретут темно-коричневую окраску, после чего их вновь тщательно промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и просматривают под иммерсионной системой микроскопа.<br>
<a id="p100082"></a>1.2. Окраска по Пашену. Для окраски по методу Пашена предварительно готовят раствор для протравы по Леффлеру, состоящий из 20%-ого водяного раствора танина - 100 мл насыщенного водного раствора сернокислого закисного аммиачного железа - 50 мл и насыщенного спиртового раствора основного фуксина - 10 мл.<br>
<a id="p100083"></a>Перед окраской раствор фильтруют, наносят его на препараты, осторожно подогревают до появления паров и оставляют на несколько минут для остывания, затем смывают дистиллированной водой и наносят на препараты карболовый фуксин Циля; осторожно подогревают до появления паров, оставляют для остывания и снова промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и просматривают под иммерсионной системой микроскопа.

</div>




<a id="p100084"></a>

---