---
title: "\"Методические рекомендации N 10-5ФЦ/2557. Качественное и количественное определение генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения в продуктах питания и пищевом сырье с использованием \"сухих\" наборов реагентов серии \"RT-ПЦР-ядро\""
number: "10-5ФЦ/2557"
issuer: "Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/10-5fts2557"
---

## "Методические рекомендации N 10-5ФЦ/2557. Качественное и количественное определение генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения в продуктах питания и пищевом сырье с использованием "сухих" наборов реагентов серии "RT-ПЦР-ядро"

# "Методические рекомендации N 10-5ФЦ/2557. Качественное и количественное определение генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения в продуктах питания и пищевом сырье с использованием "сухих" наборов реагентов серии "RT-ПЦР-ядро"

(утв. Роспотребнадзором 09.09.2005)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Главный врач ФГУЗ
"Федеральный центр
гигиены и эпидемиологии"
Федеральной службы
по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека
**А.И.ВЕРЕЩАГИН**
9 сентября 2005 года

<a id="p100002"></a>**КАЧЕСТВЕННОЕ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ**
**ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ (ГМИ) РАСТИТЕЛЬНОГО**
**ПРОИСХОЖДЕНИЯ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ И ПИЩЕВОМ СЫРЬЕ**
**С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ "СУХИХ" НАБОРОВ РЕАГЕНТОВ**
**СЕРИИ "RT-ПЦР-ЯДРО"**

<a id="p100003"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ**
**N 10-5ФЦ/2557**

1. <a id="p100004"></a>Разработаны: ООО "Компания "Биоком" (Цветков И.Л., Сердобинский Л.А., Комаров А.Б.); ЗАО "Сэйдж" (Гусев В.В., Чабаненко А.А.); ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Брагина И.В., Воронцова Т.В., Потапова Т.Н., Авдеенко Т.Ф., Терехова С.Ю.).
2. <a id="p100005"></a>Введены впервые.

1. <a id="p100006"></a>Общие положения и область применения

<a id="p100007"></a>1.1. Настоящие Методические рекомендации подготовлены для выявления и количественного определения генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения в продуктах питания и пищевом сырье методом ПЦР в режиме реального времени с помощью "сухих" наборов реагентов серии "RT-ПЦР-ядро" производства ООО "Компания "Биоком".
<a id="p100008"></a>1.2. Методические рекомендации разработаны в соответствии с Федеральным законом от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения", Федеральным законом от 9 января 1996 г. N 2-ФЗ "О защите прав потребителей".
<a id="p100009"></a>1.3. Методические рекомендации предназначены для применения в лабораториях организаций Роспотребнадзора, осуществляющих контроль за качеством и безопасностью продовольственного сырья и пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, в лабораториях других организаций, аккредитованных в установленном порядке.
<a id="p100010"></a>1.4. Методические рекомендации могут применяться при контроле растительного сырья и продуктов питания на наличие генетически модифицированных источников на этапах постановки на производство, санитарно-эпидемиологической экспертизы, государственной регистрации, закупки, ввоза в Российскую Федерацию и реализации.

2. <a id="p100011"></a>Нормативные ссылки

<a id="p100012"></a>2.1. Федеральный закон от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
<a id="p100013"></a>2.2. Федеральный закон от 9 января 1996 г. N 2-ФЗ "О внесении изменений и дополнений в Закон Российской Федерации "О защите прав потребителей" и Кодекс РСФСР об административных правонарушениях".
<a id="p100014"></a>2.3. Федеральный закон от 2 января 2000 г. N 29-ФЗ "О качестве и безопасности пищевых продуктов".
<a id="p100015"></a>2.4. Федеральный закон от 5 июня 1996 г. N 86-ФЗ "О государственном регулировании в области генно-инженерной деятельности".
<a id="p100016"></a>2.5. Федеральный закон от 21 июня 2000 г. N 96-ФЗ "О внесении изменений и дополнений в Федеральный закон "О государственном регулировании в области генно-инженерной деятельности".
<a id="p100017"></a>2.6. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 6 апреля 1999 г. N 7 "О порядке гигиенической оценки и регистрации пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников".
<a id="p100018"></a>2.7. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 16 сентября 2003 г. N 149 "О проведении микробиологической и молекулярно-генетической экспертизы генетически модифицированных микроорганизмов, используемых в производстве пищевых продуктов".
<a id="p100019"></a>2.8. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 8 ноября 2000 г. N 14 "О порядке проведения санитарно-эпидемиологической экспертизы пищевых продуктов, полученной из генетически модифицированных источников".
<a id="p100020"></a>2.9. [Постановление](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-13-2004-glavnyy-gosudarstvennyy) Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 31 декабря 2004 г. N 13 "Об усилении надзора за пищевыми продуктами, полученными из генетически модифицированных источников".
<a id="p100021"></a>2.10. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. СанПиН 2.3.2.1078-01.
<a id="p100022"></a>2.11. Организация работы лабораторий, проводящих исследования с патогенными биологическими агентами III - IV групп патогенности методом полимеразной цепной реакции. МУ 1.3.1888-04.
<a id="p100023"></a>2.12. Методы количественного определения генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения в продуктах питания. МУК 4.2.1913-04.
<a id="p100024"></a>2.13. Методы идентификации модифицированных источников ГМИ растительного происхождения. МУК 4.2.1902-04.

3. <a id="p100025"></a>Сущность метода


#### <a id="p100026"></a>3.1 Качественное определение ГМИ


<a id="p100027"></a>Метод выявления генетически модифицированных источников в продуктах питания и пищевом сырье растительного происхождения с помощью "сухих" наборов реагентов "35S-RT-ПЦР-ядро", "NOS-RT-ПЦР-ядро", "FLANK-RT-ПЦР-ядро", "CRY-RT-ПЦР-ядро" основан на использовании полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени (Real Time PCR).
<a id="p100028"></a>Метод направлен на одновременное или раздельное выявление универсальных маркеров генетически модифицированной (ГМ) ДНК-35S промотора вируса мозаики цветной капусты и терминатора NOS из Agrobacterium tumefaciens, а также специфического маркера - фрагмента гена-вставки: cryIAb, используемого для получения растений кукурузы с повышенной устойчивостью к стеблевому мотыльку.
<a id="p100029"></a>Процедура определения ГМИ включает следующие этапы: отбор образцов, пробоподготовка, выделение ДНК из исследуемого образца, проведение амплификации с детекцией в режиме реального времени, анализ результатов амплификации.
<a id="p100030"></a>Выделение ДНК из исследуемого материала проводят на сорбенте с помощью набора реагентов серии Silica (ООО "Компания "Биоком", г. Москва), что позволяет выделять высокомолекулярную ДНК без примеси ингибиторов ПЦР практически из всего разнообразия растительного сырья, готовых пищевых продуктов и полуфабрикатов. Получаемые препараты ДНК непосредственно используются для ПЦР. Определение концентрации ДНК в них и дополнительное разбавление не требуется.
<a id="p100031"></a>Для проведения амплификации используют наборы готовых к использованию реагентов для ПЦР ("35S-RT-ПЦР-ядро", "NOS-RT-ПЦР-ядро", "FLANK-RT-ПЦР-ядро", "CRY-RT-ПЦР-ядро"), которые включают в себя: 1) пробирки с сухой амплификационной смесью "RT-ПЦР-ядро", 2) жидкие реагенты - ПЦР-растворитель, смесь праймеров, краситель SYBR Green, 3) ДНК для положительного контроля.


#### <a id="p100032"></a>3.2 Количественное определение ГМИ


<a id="p100033"></a>Метод количественного определения генетически модифицированной ДНК трансгенной сои линии 40-3-2 в продуктах питания и пищевом сырье растительного происхождения с помощью "сухого" набора реагентов "CP4-LEC-RT-ПЦР-ядро" основан на использовании полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени (Real Time PCR).
<a id="p100034"></a>Метод позволяет определить процентное содержание генетически модифицированной ДНК в анализируемом образце путем определения отношения концентраций ДНК генно-инженерной вставки (ген устойчивости к гербициду Раундап cp4) к тотальной ДНК соевого компонента (по гену лектина сои lec). Это позволяет выявлять и количественно характеризовать ДНК ГМ сои вне зависимости от наличия других компонентов растительного и животного происхождения в составе анализируемого образца.
<a id="p100035"></a>Необходимо отметить, что использование универсальных маркеров ГМИ (например, 35S промотора ВМЦК) для количественного определения многокомпонентных образцов непригодно. Такие образцы могут содержать более 1 копии вышеназванных генно-инженерных элементов в геноме, что будет приводить к ошибке. Также существуют линии, изначально содержащие более 1 копии регуляторных элементов (например, два 35S промотора ВМЦК у линии Bt-11 кукурузы ("Сингента Сидс", Франция)).
<a id="p100036"></a>Процедура количественного определения ГМИ включает все стадии качественного определения ГМИ по [п. 3.1](#p100026), а также - использование специальной компьютерной программы для определения процентного содержания ГМИ в анализируемых образцах.
<a id="p100037"></a>Выделение ДНК из исследуемого материала проводят на сорбенте с помощью набора реагентов серии Silica (ООО "Компания "Биоком", г. Москва).
<a id="p100038"></a>Для проведения амплификации используют набор готовых к использованию реагентов "CP4-LEC-RT-ПЦР-ядро", который включает в себя:
1) <a id="p100039"></a>пробирки с сухой амплификационной смесью "RT-ПЦР-ядро";
2) <a id="p100040"></a>жидкие реагенты - ПЦР-растворитель, смесь олигонуклеотидов (праймеры и зонд с меткой FAM) для генно-инженерной вставки - гена cp4, смесь олигонуклеотидов (праймеры и зонд с меткой ROX) для гена лектина сои lec;
3) <a id="p100041"></a>3 калибровочных раствора ДНК трансгенной сои линии 40-3-2 с известной концентрацией ГМИ (0,1, 1,0 и 5,0%) для проведения калибровки прибора.

4. <a id="p100042"></a>Получение результатов при проведении ПЦР в режиме
реального времени

<a id="p100043"></a>В ходе проведения ПЦР в реальном времени амплификатор Smart-Cycler(R)II (Cepheid, USA) с помощью программного обеспечения компьютера производит построение кривых флуоресценции накопленных продуктов ПЦР. Данные кривые выражают зависимость флуоресценции от количества проведенных циклов амплификации (рис. 1).

<a id="p100252"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/y2fP8leF5/img_0.png) 

<a id="p100253"></a>Рис. 1. Кривая флуоресценции накопленных ПЦР-продуктов,
отображенная в ходе ПЦР в реальном времени. Стрелкой
обозначена точка начала log-фазы ПЦР и соответствующее
ей количество выполненных циклов (32.32)

<a id="p100044"></a>При этом, прибор автоматически определяет точку начала log-фазы, выраженную в количестве выполненных циклов. Эта точка характеризует исходное количество ДНК-матрицы в реакционной смеси.
<a id="p100045"></a>В ходе качественного определения ГМИ накопление продукта ПЦР в реакционной смеси детектируют с помощью интеркалирующего красителя SYBR Green.
<a id="p100046"></a>Для количественного анализа одного образца необходимо провести две отдельные реакции (в одном температурном режиме): одна - для выявления фрагмента генно-инженерной вставки, другая - для выявления природного гена. В процессе ПЦР в режиме реального времени проводится детекция ампликонов гена-вставки cp4 и природного гена lec. Для этого в наборе "CP4-LEC-RT-ПЦР-ядро" используется 2 типа олигонуклеотидов (зондов), флуоресцентно меченных агентами FAM и ROX. Краситель FAM (длина волны максимума поглощения - 494 нм, длина волны максимума испускания (флуоресценции) - 518 нм), предназначен для количественного определения генно-инженерной "вставки", а ROX (или Texas Red; длина волны максимума поглощения - 580 нм, длина волны максимума испускания (флуоресценции) - 605 нм), предназначен для количественного определения природного гена.
<a id="p100047"></a>Амплификатор Smart-Cycler(R)II проводит построение кривых накопления и определение точек начала log-фазы (Ct) (рис. 2).

<a id="p100254"></a> ![рис. 2](https://i.bukva.ai/y2fP8leF5/img_1.png) 



<a id="p100255"></a> ![рис. 3](https://i.bukva.ai/y2fP8leF5/img_2.png) 

<a id="p100256"></a>Рис. 2. Кривые флуоресценции накопленных продуктов ПЦР
образцов А и Б, отображенных в ходе ПЦР в реальном времени
(детекция по FAM - рис. 2.1, детекция по ROX - рис. 2.2)

<a id="p100048"></a>Доля ГМИ (%) в анализируемых образцах характеризуется разностью CtFAM - CtROX $(\Delta Ct)$ и рассчитывается с помощью прилагаемой к набору реагентов "CP4-LEC-RT-ПЦР-ядро" компьютерной программы в формате Excel.
<a id="p100049"></a>Минимальное процентное содержание ГМИ, которое позволяет точно определить данная Методика, составляет не менее 0,1%.

5. <a id="p100050"></a>Особенности проведения работ в ПЦР-лаборатории,
в которой используется метод ПЦР в режиме реального времени

<a id="p100051"></a>5.1. Помещение лаборатории должно быть разделено на зоны, предназначенные для каждой стадии ПЦР-исследования. В целом следует выделить не менее трех рабочих зон:
<a id="p100052"></a>5.1.1. Зона регистрации и предобработки образцов предназначена для регистрации поступающего в лабораторию материала, его временного хранения и подготовки анализируемых образцов для выделения ДНК;
<a id="p100053"></a>5.1.2. Зона выделения ДНК предназначена для выделения ДНК из исследуемого материала, прошедшего предобработку в предыдущей зоне, а также временного хранения проб выделенной ДНК;
<a id="p100054"></a>5.1.3. Зона проведения ПЦР предназначена для приготовления реакционной смеси (внесение растворителя и олигонуклеотидов в готовую "сухую" амплификационную смесь), проведения ПЦР-анализа и детекции результатов в режиме реального времени.

#### <a id="p100055"></a>5.2 Оборудование

<a id="p100056"></a>Каждая зона должна иметь свои комплекты реагентов, автоматических пипеток, расходных материалов, пластиковой и стеклянной посуды, халатов, перчаток и соответствующего лабораторного оборудования, используемых только в данном помещении и не выносящихся за его пределы. Для термостатирования пробирок при выделении ДНК из биологического материала, а также при размораживании олигонуклеотидов перед их добавлением в амплификационную смесь необходимо использовать термостаты и охладители проб с твердотельным термоблоком, чтобы избежать перекрестной контаминации и появления ложноположительных результатов.

#### <a id="p100057"></a>5.3 Требования к проведению исследований

<a id="p100058"></a>5.3.1. Весь материал, поступающий в ПЦР-лабораторию для исследования, должен быть промаркирован и обязательно зарегистрирован в специальном журнале постоянным сотрудником, который несет персональную ответственность за сохранность исследуемого материала в течение требуемого срока, а также утилизацию этого материала.
<a id="p100059"></a>5.3.2. Необходимо использовать одноразовые пробирки и наконечники для автоматических пипеток. Обязательно менять наконечники при переходе от одной пробы к другой с целью предотвращения перекрестной контаминации в процессе выделения ДНК и приготовления реакционной смеси.
<a id="p100060"></a>5.3.3. Использованные наконечники для автоматических пипеток, пробирки и другие загрязненные ДНК материалы необходимо обработать реагентами, вызывающими разрушение ДНК.
<a id="p100061"></a>5.3.4. Необходимо строго соблюдать условия хранения всех используемых реагентов, указанные в прилагаемой к набору инструкции. Образцы ДНК и анализируемый материал должны храниться отдельно от реагентов. Запрещается использовать реагенты с просроченным сроком годности или хранившиеся в ненадлежащих условиях.
<a id="p100062"></a>5.3.5. Необходимо постоянно поддерживать чистоту на рабочем месте. Во всех помещениях ПЦР-лаборатории должна регулярно проводиться ежедневная влажная уборка. Рабочие поверхности столов перед началом и по окончании работ должны быть обработаны соответствующими реагентами или ультрафиолетовым излучением для деградации ДНК.

#### <a id="p100063"></a>5.4 Требования к персоналу

<a id="p100064"></a>5.4.1. Персонал, работающий в ПЦР-лаборатории, где используется метод ПЦР в режиме реального времени, должен пройти соответствующее обучение.

6. <a id="p100065"></a>Аппаратура, материалы и реагенты


#### <a id="p100066"></a>6.1 Аппаратура и материалы


<a id="p100067"></a>6.1.1. Программируемый термостат (амплификатор) с детекцией ПЦР-продукта в реальном времени; Smart-Cycler(R)II (Cepheid, USA) с принадлежностями. Характеристики приведены в Таблице 1.

<a id="p100068"></a>Таблица 1

<a id="p100069"></a>**ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОГРАММИРУЕМОГО ТЕРМОСТАТА (АМПЛИФИКАТОРА)**
**С ДЕТЕКЦИЕЙ ПЦР-ПРОДУКТА В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ**
**SMART-CYCLER(R)II (CEPHEID, USA)**


<table>
<colgroup><col width="30%"><col width="17%"><col width="17%"><col width="17%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td colspan="5"><a id="p100070"></a>Оптическая часть</td></tr>
<tr><td><a id="p100071"></a>Чувствительность детекции флюорофоров</td><td colspan="4">&lt; 2 нМ для FAM/Cy3/TxR/Cy5</td></tr>
<tr><td colspan="5"><a id="p100072"></a>Характеристики оптических каналов</td></tr>
<tr><td><a id="p100073"></a>Каналы</td><td>1 <a href="#p100082">&lt;*&gt;</a></td><td>2</td><td>3 <a href="#p100082">&lt;*&gt;</a></td><td>4</td></tr>
<tr><td><a id="p100074"></a>Источник возбуждения (nm)</td><td>450 - 495</td><td>500 - 550</td><td>565 - 590</td><td>630 - 650</td></tr>
<tr><td><a id="p100075"></a>Фильтры для детекции (nm)</td><td>510 - 527</td><td>565 - 590</td><td>606 - 650</td><td>670 - 750</td></tr>
<tr><td><a id="p100076"></a>Одноцветная детекция</td><td>FAM, SYBR(R) Green</td><td>Cy3, ТЕТ</td><td>ROX, Texas Red</td><td>Cy5</td></tr>
<tr><td><a id="p100077"></a>Мультиплексная детекция</td><td>FAM</td><td>Cy3</td><td>Texas Red</td><td>Cy5</td></tr>
<tr><td><a id="p100078"></a>Температурный контроль</td><td colspan="4">Наличие твердофазного нагревателя и принудительного воздушного охлаждения в каждом модуле.<br>Термисторы рабочей зоны каждого из 16 независимо управляемых модулей откалиброваны с точностью +/- 0,50 °C в соответствии со стандартами NIST (Национальной организации по стандартизации)</td></tr>
<tr><td colspan="5"><a id="p100079"></a>Эксплуатационные параметры</td></tr>
<tr><td><a id="p100080"></a>Скорость нагрева (max)</td><td colspan="4">10 °C/с от 50 до 95 °C</td></tr>
<tr><td><a id="p100081"></a>Скорость охлаждения (max)</td><td colspan="4">2,5 °C/с от 95 до 50 °C</td></tr>
<tr><td colspan="5"><a id="p100082"></a>&lt;*&gt; Каналы, обязательные для работы</td></tr>
</table>


<a id="p100083"></a>6.1.2. Микроцентрифуга-вортекс ТЭТА-2 (скорость вращения 250 - 3000 об./мин.).
<a id="p100084"></a>6.1.3. Центрифуга настольная для микропробирок (скорость вращения 10000 об./мин./5000 g).
<a id="p100085"></a>6.1.4. Термостат "ТЕРМО 24-15" для микропробирок объемом 0,5 мл/1,5 мл.

##### <a id="p100086"></a>6.1.5 Охладитель проб для микропробирок объемом 0,5 мл/1,5 мл.

<a id="p100087"></a>6.1.6. Холодильник бытовой электрический, ГОСТ 26678.

##### <a id="p100088"></a>6.1.7 Система получения деионизованной воды.


##### <a id="p100089"></a>6.1.8 Облучатель бактерицидный.


##### <a id="p100090"></a>6.1.9 Микродозаторы одноканальные переменного объема:

<a id="p100091"></a>5 - 50 мкл с шагом 0,5 мкл, с точностью +/- 3,0 - +/- 0,6%;
<a id="p100092"></a>20 - 200 мкл с шагом 1,0 мкл, с точностью +/- 3,0 - +/- 0,6%;
<a id="p100093"></a>100 - 1000 мкл с шагом 5,0 мкл, с точностью +/- 1,5 - +/- 0,5%.
<a id="p100094"></a>6.1.10. Штативы "рабочее место" для микропробирок объемом 1,5 мл/0,5 мл/0,2 мл.
<a id="p100095"></a>6.1.11. Штативы-контейнеры для хранения образцов в микропробирках объемом 1,5 мл.

##### <a id="p100096"></a>6.1.12 Контейнер для сброса наконечников.


##### <a id="p100097"></a>6.1.13 Пробирки полипропиленовые конические объемом 1,5 мл.

<a id="p100098"></a>6.1.14. Пробирки полипропиленовые для Smart-Cycler с герметичными крышками объемом 25 мкл.

##### <a id="p100099"></a>6.1.15 Наконечники для микродозаторов в штативе.


##### <a id="p100100"></a>6.1.16 Перчатки резиновые или латексные неопудренные.


##### <a id="p100101"></a>6.1.17 Пинцеты медицинские, ГОСТ 21241-89.


##### <a id="p100102"></a>6.1.18 Скальпели хирургические.


##### <a id="p100103"></a>6.1.19 Ступки фарфоровые с пестиками.

<a id="p100104"></a>6.1.20. Цилиндр стеклянный мерный лабораторный на 100 мл, ГОСТ 1770-74.

##### <a id="p100105"></a>6.1.21 Пестики-гомогенизаторы для конических пробирок объемом 1,5 мл.

<a id="p100106"></a>Допускается использование аналогичного оборудования с характеристиками не хуже указанных.


#### <a id="p100107"></a>6.2 Реагенты


<a id="p100108"></a>6.2.1. Набор реагентов серии "Silica" для выделения ДНК из образцов продуктов питания или растительного сырья. Набор рассчитан на выделение ДНК из 100 проб, включая контрольные образцы.

##### <a id="p100109"></a>6.2.2 Наборы реагентов для ПЦР с детекцией в режиме реального времени:

- <a id="p100110"></a>"35S-RT-ПЦР-ядро" предназначен для выявления 35S промотора;
- <a id="p100111"></a>"NOS-RT-ПЦР-ядро" предназначен для выявления NOS терминатора;
- <a id="p100112"></a>"FLANK-RT-ПЦР-ядро" предназначен для одновременного выявления 35S промотора и NOS терминатора;
- <a id="p100113"></a>"CRY-RT-ПЦР-ядро" предназначен для выявления гена cryIAb.
<a id="p100114"></a>Все наборы рассчитаны на постановку 100 реакций, включая контрольные образцы.
- <a id="p100115"></a>"CP4-LEC-RT-ПЦР-ядро" предназначен для количественного определения ГМ ДНК сои линии 40-3-2, рассчитан на постановку 50 реакций, включая контрольные образцы.
<a id="p100116"></a>Все наборы хранятся при температуре 4 °C.
<a id="p100117"></a>6.2.3. Реагенты, разрешенные к применению и вызывающие деградацию ДНК (Дезолон и пр.).
<a id="p100118"></a>6.2.4. Спирт этиловый ректифицированный, ГОСТ Р 51652-2000.

##### <a id="p100119"></a>6.2.5 Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72.


7. <a id="p100120"></a>Отбор, хранение и подготовка проб пищевых продуктов
для анализа

<a id="p100121"></a>Для исследования пищевых продуктов растительного и смешанного происхождения, растительных кормов и продовольственного сырья на наличие ГМ ДНК (качественный анализ) и определения ее количества (количественный анализ) отбор образцов для исследования производят таким образом, чтобы не происходила перекрестная контаминация (загрязнение одного образца другим). Для этого отбор производят в перчатках, а инструменты, используемые для отбора и измельчения материала, используются однократно или обрабатываются моющими средствами, стерилизуются в пламени спиртовки (газовой горелки) и используются после охлаждения на воздухе до комнатной температуры.
<a id="p100122"></a>Отбор проб проводят по государственным стандартам, устанавливающим порядок отбора проб для однородных групп пищевой продукции: ГОСТ 5904-82, 9163-90, 12292-2000, 10852-86, 12430-66, 13979-86, 26313-84, 22617.0-77, 27668-88, 26312.1-84, 9792-73, 7631-85.
<a id="p100123"></a>7.1. Отбор и подготовка к анализу жидких и полужидких материалов исследования (соусы, пасты, майонезы и пр.)
<a id="p100124"></a>7.1.1. Содержимое каждой из десяти упаковок анализируемого материала, принадлежащих к одной партии, тщательно перемешивают при помощи одноразового шпателя.

##### <a id="p100125"></a>7.1.2 Отбирают от каждой упаковки по 1000 мкл содержимого.

<a id="p100126"></a>7.1.3. Переносят каждую аликвоту в одноразовую пластиковую пробирку объемом 15 мл и тщательно перемешивают, формируя таким образом объединенную пробу (10 мл).
<a id="p100127"></a>7.1.4. Из этой пробы отбирают при помощи автоматического дозатора среднюю пробу в 1 мл, которую помещают в одноразовую микропробирку объемом 1,5 мл, опечатывают и отправляют на анализ.
<a id="p100128"></a>7.1.5. В качестве лабораторной пробы для проведения выделения ДНК используют 100 - 150 мкл, отобранные из средней пробы в одноразовую микропробирку объемом 1,5 мл при помощи микродозатора.

#### <a id="p100129"></a>7.2 Отбор и подготовка к анализу сухих сыпучих материалов исследования (мука, белковый изолят и пр.)

<a id="p100130"></a>7.2.1. Из исследуемой партии отбирают не менее 10 навесок по 5 - 10 г каждая, которые помещают в одноразовый полиэтиленовый пакет размером 20 x 30 см и перемешивают при помощи одноразового шпателя, формируя объединенную пробу (50 - 100 г).
<a id="p100131"></a>7.2.2. Из этой пробы отбирают среднюю пробу в 10 г, которую помещают в герметично закрывающийся контейнер, опечатывают и отправляют на анализ. Если средняя проба не является гомогенной или мелкоизмельченной, то перед началом проведения анализа ее необходимо поместить в фарфоровую ступку и растереть фарфоровым пестиком до однородного мелкодисперсного гомогенного состояния.
<a id="p100132"></a>7.2.3. В качестве лабораторной пробы для проведения выделения ДНК используют 75 - 100 мкл по насыпному объему, отобранные из средней пробы в одноразовую микропробирку объемом 1,5 мл при помощи одноразового шпателя.
<a id="p100133"></a>7.3. Отбор и подготовка к анализу материалов исследования плотной консистенции (колбаса, сыр, растительные ткани, чипсы, поп-корн, соевый шрот, фуражная кукуруза и пр.)
<a id="p100134"></a>7.3.1. Из исследуемой партии отбирают не менее 10 навесок по 5 - 10 г каждая, которые помещают в одноразовый полиэтиленовый пакет размером 20 x 30 см и перемешивают при помощи одноразового шпателя, формируя объединенную пробу (50 - 100 г).
<a id="p100135"></a>7.3.2. Из объединенной пробы отбирают среднюю пробу весом 10 г, которую помещают в герметично закрывающийся контейнер, опечатывают и отправляют на анализ.
<a id="p100136"></a>7.3.3. Перед началом проведения анализа среднюю пробу измельчают при помощи скальпеля (ножниц), помещают в фарфоровую ступку и растирают фарфоровым пестиком до однородного мелкодисперсного гомогенного состояния.
<a id="p100137"></a>7.3.4. В качестве лабораторной пробы для проведения выделения ДНК используют 100 - 150 мкл по насыпному объему, отобранные из гомогенной средней пробы в одноразовую микропробирку объемом 1,5 мл при помощи одноразового шпателя.

#### <a id="p100138"></a>7.4 Условия хранения и транспортирования образцов

<a id="p100139"></a>7.4.1. Образцы исследуемого материала хранят в течение 1 месяца (при необходимости повторного анализа) согласно условиям, указанным производителем.
<a id="p100140"></a>7.4.2. Транспортирование образцов осуществляют при температуре, рекомендованной для их хранения. Длительность транспортирования не должна превышать сроков годности исследуемого материала.

8. <a id="p100141"></a>Порядок проведения исследования


#### <a id="p100142"></a>8.1 Выделение ДНК из образцов продуктов и сырья с использованием набора реагентов серии "Silica"


<a id="p100143"></a>Ответственным этапом при проведении ПЦР-анализа на наличие в пробе ГМ ДНК является выделение ДНК. Использование наборов реагентов для выделения ДНК на сорбентах позволяет исключить из процесса вредные для здоровья человека вещества и стандартизировать выход ДНК. Сущность данной Методики заключается в том, что тотальная растительная ДНК, полученная в результате клеточного лизиса, связывается с сорбентом, и в таком состоянии проходит стадии очистки, а затем при помощи элюции переходит в раствор.
<a id="p100144"></a>8.1.1. Отбирают необходимое количество одноразовых пробирок, включая отрицательный контроль выделения ДНК. В пробирки, предназначенные для исследуемых проб, внести образцы исследуемых проб (см. [раздел 7](#p100120)).
<a id="p100145"></a>8.1.2. Содержимое флаконов из набора для выделения с концентратами буферов ОБ 1 и ОБ 2 доводят до 50 мл 95 - 96%-м этиловым спиртом (ректификат) в мерном цилиндре, переливают назад во флакон и перемешивают путем переворачивания плотно закрытых флаконов 5 - 6 раз. Хранят рабочие растворы ОБ 1 и ОБ 2 в плотно закрытых флаконах при температуре 4 °C.
<a id="p100146"></a>8.1.3. В каждую пробирку с исследуемой пробой вносят 400 мкл лидирующего буфера ЛБ и гомогенизируют с помощью микрогомогенизатора (в случае кристаллизации буфера ЛБ перед употреблением его необходимо подогреть в термостате при 50 - 60 °C и перемешать до полного растворения осадка).
<a id="p100147"></a>8.1.4. Пробу инкубируют в термостате 30 мин. при 65 °C. Содержимое пробирки перемешивают на микроцентрифуге-вортексе. В случае, когда содержимое пробирки затвердело во время инкубации в термостате, в эту же пробирку добавляют 300 мкл (при необходимости до 1000 мкл) буфера ЛБ и тщательно перемешивают на микроцентрифуге-вортексе. Затем пробу центрифугируют 10 мин. при 10000 об./мин. (5000 - 6000 g). Надосадочную жидкость, не задевая осадка, полностью отбирают с помощью микродозатора и переносят в чистую пробирку объемом 1,5 мл.
<a id="p100148"></a>8.1.5. К надосадочной жидкости добавляют 40 мкл суспензии сорбента. Перед использованием сорбент перемешивают на микроцентрифуге-вортексе до получения однородной суспензии. Далее содержимое пробирки перемешивают на микроцентрифуге-вортексе и инкубируют при комнатной температуре 7 - 10 мин., периодически перемешивая путем переворачивания плотно закрытой пробирки 2 - 3 раза. Затем содержимое осаждают на микроцентрифуге-вортексе 60 с при максимальных оборотах. Надосадочную жидкость полностью удаляют при помощи автоматического микродозатора.
<a id="p100149"></a>8.1.6. К осадку добавляют 500 мкл рабочего раствора буфера ОБ 1, содержимое пробирки перемешивают на микроцентрифуге-вортексе до получения однородной суспензии, а затем центрифугируют на микроцентрифуге-вортексе 20 с при максимальных оборотах. Надосадочную жидкость удаляют микродозатором или декантированием.
<a id="p100150"></a>8.1.7. К осадку добавляют 500 мкл рабочего раствора ОБ 2, содержимое пробирки перемешивают на микроцентрифуге-вортексе до получения однородной суспензии, а затем центрифугируют на микроцентрифуге-вортексе 20 с при максимальных оборотах. Надосадочную жидкость удаляют микродозатором или декантированием.
<a id="p100151"></a>8.1.8. Повторяют операции, изложенные в [п. 8.1.7](#p100150). В последний раз надосадочную жидкость удаляют как можно более полно, не задевая при этом осадка.
<a id="p100152"></a>8.1.9. Пробирку открывают и сушат осадок в термостате 5 - 7 мин. при 65 °C.
<a id="p100153"></a>8.1.10. К высушенному осадку добавляют 75 мкл буфера ТЕ. Перемешивают содержимое пробирки на микроцентрифуге-вортексе до получения однородной суспензии и термостатируют 10 мин. при 65 °C. (Если осадок сорбента сразу не суспендируется, пробирку помещают в термостат на 2 - 3 мин., после чего вновь перемешивают.)
<a id="p100154"></a>8.1.11. Содержимое пробирки еще раз перемешивают на микроцентрифуге-вортексе и центрифугируют в течение 2 мин. при 10000 об./мин. (5000 g).
<a id="p100155"></a>8.1.12. Надосадочную жидкость (экстракт ДНК) переносят в новую пробирку, не задевая при этом осадка, поскольку попадание в нее сорбента может в дальнейшем приводить к ингибированию ПЦР.
<a id="p100156"></a>8.1.13. Полученный экстракт ДНК хранить при 4 °C не более 1 мес. или при минус 18 °C не более 1 года.


#### <a id="p100157"></a>8.2 Качественное определение генетически модифицированной ДНК методом ПЦР в режиме реального времени


<a id="p100158"></a>8.2.1. Размещают в штативе и маркируют необходимое количество пробирок "ПЦР-ядро" по числу анализируемых проб, включая пробирки для положительного и отрицательного контролей. Для повышения достоверности результатов анализа рекомендуется его проведение в трех повторностях для каждого образца.
<a id="p100159"></a>8.2.2. В каждую пробирку "ПЦР-ядро" добавляют по 10 мкл ПЦР-растворителя и по 5 мкл соответствующей проводимому анализу смеси праймеров (если смесь праймеров хранилась в замороженном состоянии, ее необходимо разморозить в охладителе проб при 4 °C, и, используя микроцентрифугу-вортекс, перемешать 5 - 10 с, а затем осадить капли на дно пробирки; при работе с праймерами их необходимо держать при 4 °C в охладителе проб).

##### <a id="p100160"></a>8.2.3 В пробирки "ПЦР-ядро" с ПЦР-смесью добавляют анализируемые и контрольные образцы:

<a id="p100161"></a>а) в пробирки "ПЦР-ядро" для исследуемых образцов вносят по 10 мкл соответствующего препарата ДНК;
<a id="p100162"></a>б) в одну из пробирок "ПЦР-ядро" для отрицательного контроля (К-) вносят 10 мкл буфера ТЕ из комплекта используемого набора для выделения ДНК (Silica);
<a id="p100163"></a>с) в последнюю очередь (!!!) еще в одну пробирку "ПЦР-ядро" для положительного контроля (К+) вносят 10 мкл раствора положительного контроля.
<a id="p100164"></a>8.2.4. Содержимое еще раз аккуратно перемешивают в пробирках путем встряхивания на микроцентрифуге-вортексе. После растворения и перемешивания содержимое пробирок "ПЦР-ядро" полностью переносят в специальные пробирки для Smart-Cycler объемом 25 мл и плотно закрывают крышки.
<a id="p100165"></a>8.2.5. Центрифугируют пробирки 3 - 5 с на центрифуге из комплекта принадлежностей для Smart-Cycler.
<a id="p100166"></a>8.2.6. Пробирки с готовой ПЦР-смесью помещают в амплификатор Smart-Cycler и запускают программу амплификации (табл. 2).

<a id="p100167"></a>Таблица 2


<table>
<colgroup><col width="18%"><col width="20%"><col width="20%"><col width="30%"><col width="12%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100168"></a>Этап программы</td><td colspan="2">Режим амплификации</td><td rowspan="2">Процесс</td><td rowspan="2">Число циклов</td></tr>
<tr><td>температура, °C</td><td>время, с</td></tr>
<tr><td><a id="p100169"></a>1</td><td>94</td><td>180</td><td>денатурация ДНК</td><td>1</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100170"></a>2</td><td>94</td><td>20</td><td>денатурация ДНК</td><td rowspan="2">35</td></tr>
<tr><td><a id="p100171"></a>70 &lt;*&gt;</td><td>40</td><td>отжиг праймеров и элонгация</td></tr>
<tr><td colspan="5"><a id="p100172"></a>&lt;*&gt; Включение оптики для детекции ПЦР-продуктов (в реальном времени): канал для красителей FAM и SYBR Green</td></tr>
</table>



#### <a id="p100173"></a>8.3 Количественное определение генетически модифицированной ДНК сои линии 40-3-2 методом ПЦР в режиме реального времени


<a id="p100174"></a>8.3.1. Размещают в штативе и маркируют соответствующим образом необходимое количество пробирок "ПЦР-ядро" (из расчета две пробирки - на анализ одного образца), для повышения достоверности результатов анализа рекомендуется его проведение в трех повторностях для каждого образца.
<a id="p100175"></a>8.3.2. Для построения калибровочной кривой используют калибровочные растворы ГМ сои линии 40-3-2 с содержанием ГМ ДНК 0,1, 1,0, 5,0% (положительные контроли). Для этого в штативе дополнительно размещают и маркируют 3 пары пробирок "ПЦР-ядро".

##### <a id="p100176"></a>8.3.3 В каждую пробирку "ПЦР-ядро" добавляют 10 мкл ПЦР-растворителя.

<a id="p100177"></a>8.3.4. В одну из пробирок от каждой пары вносят по 10 мкл смеси праймеров, специфичных для гена-вставки cp4 и зонда, меченного FAM.
<a id="p100178"></a>8.3.5. Во вторую пробирку от каждой пары вносят по 10 мкл смеси праймеров, специфичных для гена лектина сои lec и зонда, меченного ROX.
<a id="p100179"></a>8.3.6. В каждую пару пробирок "ПЦР-ядро" с готовой ПЦР-смесью добавляют по 5 мкл препарата ДНК каждого из исследуемых образцов. Для построения калибровочных кривых вместо образцов ДНК в каждую пару дополнительных пробирок вносят по 5 мкл калибровочного раствора ДНК (0,1, 1,0, 5,0%).
<a id="p100180"></a>8.3.7. Содержимое всех пробирок перемешивают на микроцентрифуге-вортексе.
<a id="p100181"></a>8.3.8. Осаждение ПЦР-смеси проводят в течение 5 - 7 с на микроцентрифуге-вортексе при максимальных оборотах.
<a id="p100182"></a>8.3.9. После растворения и перемешивания содержимое пробирок полностью переносят в специальные пробирки для Smart-Cycler объемом 25 мкл и плотно закрывают крышки.
<a id="p100183"></a>8.3.10. Осаждение смеси проводят в течение 3 - 5 с на центрифуге из комплекта принадлежностей для Smart-Cycler.
<a id="p100184"></a>8.3.11. Пробирки с готовой ПЦР-смесью помещают в амплификатор Smart-Cycler и запускают программу амплификации (табл. 3).

<a id="p100185"></a>Таблица 3


<table>
<colgroup><col width="18%"><col width="20%"><col width="20%"><col width="30%"><col width="12%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100186"></a>Этап программы</td><td colspan="2">Режим амплификации</td><td rowspan="2">Процесс</td><td rowspan="2">Число циклов</td></tr>
<tr><td>температура, °C</td><td>время, с</td></tr>
<tr><td><a id="p100187"></a>1</td><td>94</td><td>180</td><td>денатурация ДНК</td><td>1</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100188"></a>2</td><td>94</td><td>20</td><td>денатурация ДНК</td><td rowspan="3">50</td></tr>
<tr><td><a id="p100189"></a>56 &lt;*&gt;</td><td>30</td><td>отжиг праймеров</td></tr>
<tr><td><a id="p100190"></a>72</td><td>30</td><td>элонгация</td></tr>
<tr><td colspan="5"><a id="p100191"></a>&lt;*&gt; Оптика включена.</td></tr>
<tr><td colspan="5"><a id="p100192"></a>Примечание. Из имеющихся в используемом амплификаторе оптических каналов необходимо выбрать два канала, волновые характеристики которых соответствуют оптимумам поглощения/излучения красителей FAM и ROX (494/518 нм и 580/605 нм соответственно) и производить регистрацию величин флуоресценции с обоих каналов в соответствии с инструкцией к прибору</td></tr>
</table>


9. <a id="p100193"></a>Интерпретация результатов анализа


#### <a id="p100194"></a>9.1 Качественное определение ГМИ


<a id="p100195"></a>9.1.1. Детекцию продукта ПЦР проводят в соответствии с описанием к амплификатору Smart-Cycler. Амплификатор в процессе работы регистрирует величины флуоресценции по каналу для красителя FAM и с помощью программного обеспечения строит кривые. В положительном контроле должно наблюдаться увеличение интенсивности флуоресценции, а построенный прибором график в этом случае должен иметь вид S-образной кривой (см. [рис. 1](#p100253)), что свидетельствует о нормальном протекании ПЦР. Подобная картина должна наблюдаться и во всех положительных образцах. В отрицательном контроле не должно происходить накопления продукта ПЦР, поэтому построенный прибором график в этом случае должен иметь вид прямой линии, что подтверждает корректность проводимого анализа. Подобная картина должна наблюдаться и во всех отрицательных образцах.
<a id="p100196"></a>9.1.2. Результаты качественного анализа отображаются в сводных таблицах (колонка для FAM) и обозначаются POS (positive) для положительных образцов и NEG (negative) для отрицательных образцов.


| <a id="p100197"></a>Sample ID | Sample Type | Notes | Status | FAM Std/Res |
| --- | --- | --- | --- | --- |
|  | <a id="p100198"></a>UNKN |  | OK | NEG |
|  | <a id="p100199"></a>UNKN |  | OK | NEG |
|  | <a id="p100200"></a>UNKN |  | OK | POS |
|  | <a id="p100201"></a>UNKN |  | OK | POS |
|  | <a id="p100202"></a>UNKN |  | OK | POS |
|  | <a id="p100203"></a>UNKN |  | OK | POS |



#### <a id="p100204"></a>9.2 Количественное определение ГМИ


<a id="p100205"></a>9.2.1. Учет первичных результатов ПЦР в реальном времени проводят путем определения точки начала log-фазы по красителям FAM (CtFAM) и ROX (CtROX), которые выражены в количестве выполненных циклов амплификации (данные выводятся в сводную таблицу результатов в соответствующем окне компьютерной программы - см. инструкцию к прибору Smart-Cycler).


| <a id="p100206"></a>Sample<br>ID | Sample<br>Type | Notes | Status | FAM<br>Std/Res | FAM<br>Ct | Cy3<br>Std/Res | Cy3<br>Ct | TxR<br>Std/Res | TxR<br>Ct | Cy5<br>Std/Res |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- |
|  | <a id="p100207"></a>UNKN |  | OK | POS | 37,94 | NEG | 0,00 | NEG | 0,00 | NEG |
|  | <a id="p100208"></a>UNKN |  | OK | POS | 39,33 | NEG | 0,00 | NEG | 0,00 | NEG |
|  | <a id="p100209"></a>UNKN |  | OK | NEG | 0,00 | POS | 28,85 | POS | 23,59 | NEG |
|  | <a id="p100210"></a>UNKN |  | OK | NEG | 0,00 | POS | 29,94 | POS | 24,26 | NEG |


<a id="p100211"></a>9.2.2. Данные по процентному содержанию ГМИ, CtFAM и CtROX для трех калибровочных растворов в трех повторностях вводят в таблицу в формате "Excel" (см. диск-приложение к набору реагентов).


| <a id="p100212"></a>N калибр. | % ГМИ | log % ГМИ | CtFAM | CtROX | $\Delta Ct$ | Коррел. | Наклон | Константа |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100213"></a>1.1 | 0,1 |  |  |  |  |  |  |  |
| <a id="p100214"></a>1.2 | 0,1 |  |  |  |  |  |  |  |
| <a id="p100215"></a>1.3 | 0,1 |  |  |  |  |  |  |  |
| <a id="p100216"></a>2.1 | 1 |  |  |  |  |  |  |  |
| <a id="p100217"></a>2.2 | 1 |  |  |  |  |  |  |  |
| <a id="p100218"></a>2.3 | 1 |  |  |  |  |  |  |  |
| <a id="p100219"></a>3.1 | 5 |  |  |  |  |  |  |  |
| <a id="p100220"></a>3.2 | 5 |  |  |  |  |  |  |  |
| <a id="p100221"></a>3.3 | 5 |  |  |  |  |  |  |  |
| <a id="p100222"></a>N образца | % ГМИ | log % ГМИ | CtFAM | CtROX | $\Delta Ct$ | Коррел. |  |  |


<a id="p100223"></a>Дальнейший расчет параметров линейного приближения (калибровочная кривая) производится программно по методу наименьших квадратов (Лакин Г.Ф., Биометрия. М.: Высшая школа. 1990, с. 255 - 259).
<a id="p100224"></a>9.2.3. В [таблицу](#p100212) вносят значения CtFAM и CtROX для анализируемых образцов, при этом расчет процентного содержания ГМИ производится автоматически.
<a id="p100225"></a>9.2.4. Полученные для образцов значения процентного содержания ГМИ считаются достоверными, если коэффициент корреляции составляет не менее 0,95. В противном случае постановку с калибровочными растворами нужно повторить.





<a id="p100226"></a>Приложение 1

<a id="p100227"></a>**ХАРАКТЕРИСТИКИ АМПЛИФИКАТОРА SMART-CYCLER II,**
**КОТОРЫЕ ЯВЛЯЮТСЯ СУЩЕСТВЕННЫМИ ПРИ ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИИ**
**ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ МАССОВЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ**


| <a id="p100228"></a>Технические особенности | Характеристики |
| --- | --- |
| <a id="p100229"></a>Компактность, удобство транспортирования | Минимальное время подготовки к работе |
| <a id="p100230"></a>Наличие простых алгоритмов запуска программы | Легкость в управлении прибором<br>Запуск заключается только в выборе программы и указании занятых пробирками модулей прибора<br>Считывание результатов осуществляется непосредственно в ходе выполнения программы, а не по ее завершении |
| <a id="p100231"></a>Особая, уникальная оптическая система детекции с неподвижными элементами: источниками света и светоприемниками, а также специальными пробирками-кюветами для проведения реакции | Калибровка проводится 1 раз в течение использования 1 набора реагентов, а не перед каждым запуском<br>Стабильность результатов |
| <a id="p100232"></a>Высокая скорость нагрева пробирок | Короткое время проведения анализов (до 40 мин.) |
| <a id="p100233"></a>Модульная конструкция и независимость работы отдельных 16 модулей друг от друга, и как следствие - независимая обработка образцов | Возможность проведения в разное время 16 программ амплификации |






<a id="p100234"></a>Приложение 2

<a id="p100235"></a>**ХАРАКТЕРИСТИКИ ГЕНЕТИЧЕСКИ-МОДИФИЦИРОВАННЫХ РАСТЕНИЙ,**
**ЗАРЕГИСТРИРОВАННЫХ МИНЗДРАВОМ РОССИИ И РАЗРЕШЕННЫХ**
**ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ПИЩЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ**
**И РЕАЛИЗАЦИИ НАСЕЛЕНИЮ**


<table>
<colgroup><col width="12%"><col width="22%"><col width="15%"><col width="12%"><col width="18%"><col width="21%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100236"></a>Вид т/г растения</td><td>Сорт/линия</td><td>Новые свойства</td><td>Трансгены</td><td>Регуляторные элементы</td><td>Наборы для определения ГМИ</td></tr>
<tr><td><a id="p100237"></a>1</td><td>2</td><td>3</td><td>4</td><td>5</td><td>6</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100238"></a>1. Соя</td><td>1. Roundup Ready/Линия 40-3-2<br>(Монсанто, США)</td><td>Устойчивость к глифосату</td><td>cp<sub>4ep</sub>sps</td><td>Промотор E35S<br>Терминатор NOS</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро<br>NOS-RT-ПЦР-ядро<br>FLANK-RT-ПЦР-ядро<br>CP4-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td><a id="p100239"></a>2. Линия А 2704-12<br>(Байер Кроп Сайенс, ФРГ)</td><td>Устойчивость к глюфосинату аммония</td><td>pat</td><td>Промотор и терминатор 35S</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td><a id="p100240"></a>3. Линия А 5547-127<br>(Байер Кроп Сайенс, ФРГ)</td><td>Устойчивость к глюфосинату аммония</td><td>pat</td><td>Промотор и терминатор 35S</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td rowspan="6"><a id="p100241"></a>2. Кукуруза</td><td>1. YieldCard/Линия MON 810<br>(Монсанто, США)</td><td>Устойчивость к стеблевому мотыльку</td><td>cryIA(b)</td><td>Промотор E35S<br>Терминатор NOS</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро<br>NOS-RT-ПЦР-ядро<br>FLANK-RT-ПЦР-ядро<br>CRY IA-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td><a id="p100242"></a>2. Линия MON863<br>(Монсанто, США)</td><td>Устойчивость к жуку Диабротика</td><td>cr<sub>y3B</sub>bI nptII</td><td>Промотор E35S<br>Терминатор гена белка теплового шока пшеницы<br>Терминатор NOS</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро<br>NPTII-RT-ПЦР-ядро<br>NOS-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td><a id="p100243"></a>3. Линия NK603<br>(Монсанто, США)</td><td>Устойчивость к глифосату</td><td>cp4epsps</td><td>Промотор E35S<br>Терминатор NOS</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро<br>NOS-RT-ПЦР-ядро<br>FLANK-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td><a id="p100244"></a>4. Линия GA 21<br>(Монсанто, США)</td><td>Устойчивость к глифосату</td><td>epsps</td><td>Актиновый промотор риса<br>Терминатор NOS</td><td>NOS-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td><a id="p100245"></a>5. Линия Т25<br>(Байер Кроп Сайенс, ФРГ)</td><td>Устойчивость к глюфосинату аммония</td><td>pat</td><td>Промотор и терминатор 35S</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td><a id="p100246"></a>6. Линия Bt-11<br>(Сингента Сидс, Франция)</td><td>Устойчивость к зерновому точильщику и глюфосинату аммония</td><td>cryIA(b) pat</td><td>Промотор E35S<br>Терминатор NOS</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро<br>NOS-RT-ПЦР-ядро<br>FLANK-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100247"></a>3. Картофель</td><td>1. Сорт Superior NewLeaf<br>(Монсанто, США)</td><td>Устойчивость к колорадскому жуку</td><td>cryIIIA nptII</td><td>Промотор E35S<br>Терминатор NOS</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро<br>NOS-RT-ПЦР-ядро<br>FLANK-RT-ПЦР-ядро<br>CRY IIIА-RT-ПЦР-ядро<br>NPTII-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td><a id="p100248"></a>2. Сорт Russet Burbank NewLeaf<br>(Монсанто, США)</td><td>Устойчивость к колорадскому жуку</td><td>cryIIIA nptII</td><td>Промотор E35S<br>Терминатор NOS</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро<br>NOS-RT-ПЦР-ядро<br>FLANK-RT-ПЦР-ядро<br>CRY IIIA-RT-ПЦР-ядро<br>NPTII-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td><a id="p100249"></a>4. Сахарная свекла</td><td>1. Линия-77<br>(Монсанто США, Сингента Сидс, Франция)</td><td>Устойчивость к глифосату</td><td>cp4epsps gus</td><td>Промотор E35S</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро<br>FLANK-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
<tr><td><a id="p100250"></a>5. Рис</td><td>1. Линия LL62<br>(Байер Кроп Сайенс, ФРГ)</td><td>Устойчивость к глюфосинату аммония</td><td>bar</td><td>Промотор и терминатор 35S</td><td>35S-RT-ПЦР-ядро</td></tr>
</table>




<a id="p100251"></a>

---